發(fā)布時(shí)間：2021-09-28 16:37

　　目的探討聯(lián)合調(diào)控Wnt和BMP信號(hào)通路在人源誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（human induced pluripotent stem cells,hiPSCs）分化為心肌細(xì)胞中的作用。方法復(fù)蘇hiPSCs培養(yǎng),倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),免疫熒光染色鑒定多能性標(biāo)記物OCT3/4、NANOG和TRA-1-60表達(dá);傳代培養(yǎng)hiPSCs,取35代以?xún)?nèi)細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。待細(xì)胞融合接近100%時(shí)開(kāi)始分化（記為分化第0天）,加入Wnt通路激活劑CHIR99021。于分化第3天加入不同濃度的IWP4（Wnt通路抑制劑）,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)心肌細(xì)胞特異性標(biāo)記物肌鈣蛋白T（troponin T,TNNT2）mRNA表達(dá),篩選IWP4最佳濃度;在不同時(shí)間點(diǎn)加入最佳濃度IWP4,通過(guò)比較TNNT2 mRNA表達(dá)篩選最佳作用時(shí)間。然后,在加入CHIR99021和IWP4基礎(chǔ)上于分化第5天加入不同濃度BMP-4以及不同時(shí)間點(diǎn)加入BMP-4,通過(guò)檢測(cè)TNNT2 mRNA表達(dá)篩選BMP-4最佳濃度及最佳作用時(shí)間。最后,將hiPSCs分為3組,Wnt調(diào)控組、BMP調(diào)控組和Wnt+BMP聯(lián)合調(diào)控組,在分化第0天加入CHIR... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)修復(fù)重建外科雜志. 2020,34(10)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3412278