目的:采用蛋白質(zhì)組學(xué)法探討C57BL/6J小鼠下丘腦和海馬組織中神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）中蛋白質(zhì)表達(dá)差異,闡明不同來源（區(qū)域） NSCs中蛋白表達(dá)譜不同的原因,為下丘腦和海馬組織NSCs的基礎(chǔ)研究和移植治療提供參考。方法:提取出生24 h內(nèi)C57BL/6J小鼠原代下丘腦和海馬組織NSCs,經(jīng)傳代進(jìn)行擴(kuò)增和純化。觀察細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn),免疫熒光法檢測NSCs中Nestin和Sox2的表達(dá),采用串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽（TMT）蛋白質(zhì)組學(xué)法分析下丘腦和海馬組織NSCs中的差異表達(dá)蛋白質(zhì),對得到的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果:形態(tài)表現(xiàn)檢測,下丘腦和海馬組織NSCs均表現(xiàn)出不透明和折光率高的典型神經(jīng)球形態(tài)。免疫熒光檢測,下丘腦和海馬組織NSCs中Nestin和Sox2陽性表達(dá)率隨培養(yǎng)代數(shù)增加而升高,在第4代達(dá)到98%以上,但下丘腦和海馬組織NSCs比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。蛋白質(zhì)組學(xué)分析,與海馬組織比較,下丘腦組織NSCs中有6種蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05和P<0.01）,4種蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05和P<0.01）�；虮倔w（GO）分析,差異蛋白... 

【文章來源】：吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020,46(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

小鼠來源的P0代下丘腦和海馬組織中NSCs形形態(tài)態(tài)表表現(xiàn)現(xiàn)（Bar=200μm)

P2～P4代下丘腦和海馬組織中NSCs中Nestin和Sox2的陽性表達(dá)率隨著代數(shù)的增加而增加，但下丘腦和海馬組織NSCs中Nestin和Sox2的表達(dá)陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。當(dāng)傳代培養(yǎng)到P2代，下丘腦組織NSCs中Sox2陽性表達(dá)率為（76.87±5.65)%(Sox2+/DPAI），海馬組織NSCs中Sox2陽性表達(dá)率為（80.75±10.76）%；下丘腦組織NSCs中Nestin陽性表達(dá)率為（74.66±9.40)%(Nestin+/DPAI），海馬組織NSCs中Nestin陽性表達(dá)率為（80.72±12.71）%，見圖3。當(dāng)傳代培養(yǎng)到P4代，下丘腦組織NSCs中Sox2陽性表達(dá)率為（98.35±2.58）%，海馬組織NSCs中Sox2陽性表達(dá)率為（99.48±1.06）%；下丘腦組織NSCs中Nestin陽性表達(dá)率為（98.73±1.81）%，海馬組織NSCs中Nestin陽性表達(dá)率為（99.48±1.06）%，見圖4（插頁三）和圖5，即傳代培養(yǎng)可以提升下丘腦和海馬組織NSCs的純化率，因此，本課題組選擇具有較高純度的P4代下丘腦和海馬組織的NSCs用于后續(xù)研究，較高的NSCs比例為蛋白質(zhì)組學(xué)的分析提供了保證。2.4 下丘腦和海馬組織中NSCs質(zhì)譜分析

通過TMT標(biāo)記聯(lián)合LC-MS/MS分析共匹配到131 016個(gè)質(zhì)譜圖，鑒定到42 456個(gè)肽段，38 195個(gè)特異性肽段和5 593種蛋白，對鑒定到的蛋白質(zhì)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：在下丘腦和海馬組織NSCs中最終得到10種差異蛋白，其中相對于海馬NSCs上調(diào)的蛋白有6種，相對于海馬NSCs下調(diào)的蛋白有4種。見表1。2.5 差異蛋白質(zhì)的GO和KEEG通路分析


本文編號：3410814