在人源HIF-1α的PAS結(jié)構(gòu)域內(nèi)設(shè)計特異性靶點,構(gòu)建Cas9-gRNA-HIF-1α敲除質(zhì)粒,并將其轉(zhuǎn)染至細(xì)胞后經(jīng)嘌呤霉素篩選出21個單克隆細(xì)胞株,隨后通過酶切、測序分析及下游基因驗證等方法檢測,最后得到一株特異性敲除HIF-1α的純合子細(xì)胞（H20）。所設(shè)計的靶點能夠有效地編輯HIF-1α,將為在其他細(xì)胞中通過CRISPR/Cas9系統(tǒng)特異性敲除HIF-1α提供方法借鑒。與此同時,也將為后續(xù)揭示HIF-1在由正常排卵事件演變成卵巢腫瘤過程中的作用機制奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：生物學(xué)雜志. 2020,37(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

sgRNA選取與質(zhì)粒的構(gòu)建

為進一步驗證H20細(xì)胞中HIF-1α蛋白的表達情況,用氯化鈷處理野生型(HIF-1α+/+)和敲除細(xì)胞(HIF-1α-/-)。免疫印跡結(jié)果(圖3)顯示,氯化鈷可明顯誘導(dǎo)野生型細(xì)胞中的HIF-1α。然而,與正常細(xì)胞相比,H20細(xì)胞中HIF-1α幾乎不表達,這說明H20細(xì)胞是HIF-1α缺失的穩(wěn)定細(xì)胞株。圖3 H20細(xì)胞中HIF-1α的蛋白表達情況

H20細(xì)胞中HIF-1α的蛋白表達情況

【參考文獻】：
期刊論文
[1]卵巢低氧微環(huán)境調(diào)節(jié)哺乳動物排卵的分子機制[J]. 楊芳,張寶云,馮光德,向偉,馬云霞,陳航,儲明星,王憑青.  遺傳. 2016(02)



本文編號：3410492