腸道菌群代謝產(chǎn)物SCFAs通過LAMTOR2調(diào)控巨噬細胞固有免疫介導(dǎo)殺菌作用及分子機制研究
發(fā)布時間：2021-09-08 15:12
肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,K.p.）是最受關(guān)注的與抗生素耐藥有關(guān)的病原體之一。多重耐藥（multidrug-resistant,MDR）K.p.和泛耐藥(extremely drug resistant（XDR）腸桿菌科細菌引起的感染急劇上升,由這些菌株引起的感染通常高死亡率、住院時間延長和費用增加。最近的研究表明,一些K.p.同時擁有毒力和多藥耐藥基因,并且可以垂直和水平傳播,可在健康個體中引起高毒力且耐藥的肺炎克雷伯菌克隆的出現(xiàn)。目前,我們對高毒力且耐藥K.p.的獨立及耐藥傳播路徑及機體致病機制仍然不明了,從而使我們有必要更好地了解其感染微生物學(xué),為開發(fā)針對K.p.感染制訂新策略奠定基礎(chǔ)。胃腸道的管腔內(nèi)含有大量的微生物,小腸腔估計有103至109個細胞/m L,而大腸含有的細菌,其濃度可達1011至1012個細胞/g。作為一個整體,它構(gòu)成了機體的一個動態(tài)平衡的生態(tài)系統(tǒng)。腸道微生物可以分解食物、促進腸腔營養(yǎng)的吸收和腸道發(fā)育的增強,從而提高飲食結(jié)構(gòu)的多樣化和人類的進化...
【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省
【文章頁數(shù)】：128 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
實驗設(shè)計
安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文27多聚甲醛中，用于觀察組織病理改變，肝臟右上葉和右腎迅速置于無酶EP管中過液氮后放于-80℃，用于后續(xù)實驗。分別保存兩份盲腸大便置于無酶EP管中，迅速過液氮后-80℃保存，分別用于后續(xù)16SrRNA糞便微生物檢測和代謝產(chǎn)物檢測。圖2小鼠肺部解剖圖Figure2Theanatomyinlungofmice注：1.尖葉；2.心尖；3.膈葉；4.副葉2.8.1.收集肺泡巨噬細胞小鼠充分麻醉放干血后，在超凈工作臺中使小鼠取仰臥位，消毒頸部毛發(fā)后，眼科剪剪剪開頸部皮膚，慢慢暴露氣管，仔細分離氣管后插入4.5號針頭并用絲線固定針頭，另一端接上1mL的注射器，取預(yù)冷1mL預(yù)冷PBS延氣管注入，并輕柔按摩小鼠胸部，再小心吸出肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF），回收率約90%，如此反復(fù)進行5次，灌洗液收集于10mL的離心管中，4℃、400g,離心5min吸取上清液，-80℃保存?zhèn)溆�，將BALF管底沉淀細胞重懸于DMEM完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、青霉素100U/ml鏈霉素100U/ml)中，于37℃、5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時，輕輕倒去未貼壁細胞，貼壁的細胞即為肺泡巨噬細胞。2.8主要實驗方法與技術(shù)2.8.2.小鼠鼻滴法細菌性肺炎模型建立
安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文34圖3兩組小鼠敗血癥表現(xiàn)。Control：腸道菌群正常組；MD：腸道菌群耗竭組Fig.3Septicemiaofmiceintwogroups.Control:normalgutmicrobiotagroup;MD:gutmicrobiotadepletiongroup隨后，我們又比較了兩組小鼠在感染肺炎克雷伯菌后肺組織和血液細菌負荷量，發(fā)現(xiàn)腸道菌群正常小鼠在感染肺炎克雷菌12h和24h后肺組織及血液（圖4）含菌量明顯比腸道菌群耗竭小鼠少。圖4小鼠肺組織及血液細菌計數(shù)。MD：腸道菌群耗竭組(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)Fig.4Bacterialcountinlungandbloodofmice.MD:gutmicrobiotadepletiongroup(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)同時我們進一步比較了不同時期肺組織及肝臟、腎臟組織病理變化及組織評分，如圖5所示，K.p.鼻滴法后成功建立小鼠急性肺損傷模型，病理改變主要包括炎癥細胞浸潤、肺血管內(nèi)皮損傷出血、肺組織充血、肺泡間隔增厚/破壞及透明膜的形成，同時發(fā)現(xiàn)在感染后不同時間段腸道
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Dysregulation of gastric H,K-ATPase by cigarette smoke extract[J]. Muna Hammadi,Mohamed Adi,Rony John,Ghalia AK Khoder,Sherif M Karam. World Journal of Gastroenterology. 2009(32)
本文編號：3391011
【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省
【文章頁數(shù)】：128 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
實驗設(shè)計
安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文27多聚甲醛中，用于觀察組織病理改變，肝臟右上葉和右腎迅速置于無酶EP管中過液氮后放于-80℃，用于后續(xù)實驗。分別保存兩份盲腸大便置于無酶EP管中，迅速過液氮后-80℃保存，分別用于后續(xù)16SrRNA糞便微生物檢測和代謝產(chǎn)物檢測。圖2小鼠肺部解剖圖Figure2Theanatomyinlungofmice注：1.尖葉；2.心尖；3.膈葉；4.副葉2.8.1.收集肺泡巨噬細胞小鼠充分麻醉放干血后，在超凈工作臺中使小鼠取仰臥位，消毒頸部毛發(fā)后，眼科剪剪剪開頸部皮膚，慢慢暴露氣管，仔細分離氣管后插入4.5號針頭并用絲線固定針頭，另一端接上1mL的注射器，取預(yù)冷1mL預(yù)冷PBS延氣管注入，并輕柔按摩小鼠胸部，再小心吸出肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF），回收率約90%，如此反復(fù)進行5次，灌洗液收集于10mL的離心管中，4℃、400g,離心5min吸取上清液，-80℃保存?zhèn)溆�，將BALF管底沉淀細胞重懸于DMEM完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、青霉素100U/ml鏈霉素100U/ml)中，于37℃、5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時，輕輕倒去未貼壁細胞，貼壁的細胞即為肺泡巨噬細胞。2.8主要實驗方法與技術(shù)2.8.2.小鼠鼻滴法細菌性肺炎模型建立
安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文34圖3兩組小鼠敗血癥表現(xiàn)。Control：腸道菌群正常組；MD：腸道菌群耗竭組Fig.3Septicemiaofmiceintwogroups.Control:normalgutmicrobiotagroup;MD:gutmicrobiotadepletiongroup隨后，我們又比較了兩組小鼠在感染肺炎克雷伯菌后肺組織和血液細菌負荷量，發(fā)現(xiàn)腸道菌群正常小鼠在感染肺炎克雷菌12h和24h后肺組織及血液（圖4）含菌量明顯比腸道菌群耗竭小鼠少。圖4小鼠肺組織及血液細菌計數(shù)。MD：腸道菌群耗竭組(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)Fig.4Bacterialcountinlungandbloodofmice.MD:gutmicrobiotadepletiongroup(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)同時我們進一步比較了不同時期肺組織及肝臟、腎臟組織病理變化及組織評分，如圖5所示，K.p.鼻滴法后成功建立小鼠急性肺損傷模型，病理改變主要包括炎癥細胞浸潤、肺血管內(nèi)皮損傷出血、肺組織充血、肺泡間隔增厚/破壞及透明膜的形成，同時發(fā)現(xiàn)在感染后不同時間段腸道
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Dysregulation of gastric H,K-ATPase by cigarette smoke extract[J]. Muna Hammadi,Mohamed Adi,Rony John,Ghalia AK Khoder,Sherif M Karam. World Journal of Gastroenterology. 2009(32)
本文編號：3391011
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