Aft型番茄是由番茄野生種L.chilense與番茄栽培種Solanum lycopersicum雜交獲得的,其果實在光下可以誘導(dǎo)合成花青素�；ㄇ嗨睾铣赏緩接蒑YB轉(zhuǎn)錄因子、bHLH轉(zhuǎn)錄因子、WD40蛋白形成的MBW復(fù)合物調(diào)控,但是番茄中不同組織部位花青素合成調(diào)控網(wǎng)絡(luò)仍不十分清晰。為探究Aft型番茄花青素合成的關(guān)鍵調(diào)控因子之間的表達關(guān)系,及它們參與不同組織花青素合成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),本論文以Aft型番茄為試材,建立遺傳轉(zhuǎn)化體系。通過實時熒光定量PCR檢測花青素合成相關(guān)MYB類（SlANT1、SlANT1-like、SlAN2、SlAN2-like）、bHLH類（SlJAF13、SlAN1）轉(zhuǎn)錄因子在根、莖、葉、子葉、下胚軸、花瓣、萼片、果皮等組織部位表達量。運用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將SlAN2p::GUS、SlAN2-likep::GUS、SlJAF13p::GUS、SlAN1p::GUS等載體轉(zhuǎn)入Aft型番茄中,通過組織化學(xué)染色判斷其在不同組織的表達情況,進一步分析轉(zhuǎn)錄因子不同組織表達模式。此外,本研究成功建立了Aft型番茄CRISPR/Cas9基因編輯體系,并對bHLH類轉(zhuǎn)錄因子SlAN1進行基... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１番茄中花青素合成代謝途徑??注：ＰＡＬ?（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ?ａｍｍｏｎｉａ－ｌｙａｓｅ）：苯兩氨酸裂解酶；Ｃ４Ｈ?（ｃｉｎｎａｍａｔｅ４－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）：肉桂??酸輕化酶；４ＣＬ?（４－ｃｏｕｍａｒａｔｅｃｏｅｎｚｙｍｅＡｌｉｇａｓｅ）：?４－香豆酷輔酶?Ａ?連接酶；ＣＨＳ?（ｃｈａｌｃｏｎｅ??－??

１祁型番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的篩選??２．４．１．１?Ｚｔ與ＩＡＡ配比及外植體類型對分化再生的影響??在ＭＳ培養(yǎng)基中添加適量細胞分裂素和生長素可以促進愈傷組織分化及誘導(dǎo)生芽，??本試驗運用的細胞分裂素為玉米素（Ｚｔ），生長素為吲哚乙酸（ＩＡＡ），Ｚｔ濃度設(shè)置為??０．５ｍｇ／Ｌ、ｌｍｇ／Ｌ、１．５ｍｇ／Ｌ、２ｍｇ／Ｌ、２．５ｍｇ／Ｌ，ＩＡＡ?濃度為?０．１ｍｇ／Ｌ，相關(guān)培養(yǎng)基編??號Ａ－Ｅ。接種于培養(yǎng)基上的子葉５?ｄ后明顯增大，１５?ｄ后有愈傷生成，３０?ｄ左右于子葉??兩端切口處生芽。如圖２－１可以看出，Ａ、Ｂ培養(yǎng)基誘導(dǎo)出芽最多且芽長勢較好；Ｅ培??養(yǎng)基中出芽也較多；Ｃ、Ｄ培養(yǎng)基出芽數(shù)較少，同期相比出芽速度較慢。如表２－１２統(tǒng)計??Ａ培養(yǎng)基出芽率最多為８０％，?Ｂ培養(yǎng)基出芽率與之差異不大為７５．６％，?Ｃ、Ｄ培養(yǎng)基出??芽率較少分別為２４．４％和３１．３％，?Ｅ培養(yǎng)基出芽率與Ｃ、Ｄ相比有所生高，為６３．３％。因??此Ａ培養(yǎng)基即Ｚｔ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ?０．１?ｍｇ／Ｌ的培養(yǎng)基對于型番前子葉分化效果最好。??ＫＩ??ｍ??ｍ??圖２－１?Ｚｔ與ＩＡＡ濃度誘導(dǎo)番茄子葉生芽??表２－１２?Ｚｔ與ＩＡＡ濃度對番茄子葉誘導(dǎo)生芽的影響??激素濃度（ｍｇ／Ｌ）?子葉數(shù)（個）?出芽數(shù)（個）?出芽率（％）????Ｚｔ?ＩＡＡ????￣Ａ?０５?〇７ｌ?９０?７２?８０￣??Ｂ?１?０．１?９０?６８?７５．６??Ｃ?１．５?０．１?９０?２２?２４．４??Ｄ?２?０．１?９０?２８?３１．１???Ｅ?Ｚ５?ＯＡ?９０?５７?６３３???－１４－??

?２農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Ａｆｔ型番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立???下胚軸作為外植體的分化試驗中，接種于培養(yǎng)基上的下胚軸１５?ｄ后有愈傷生成，３０??ｄ后于切口處出芽。如圖２－２可以看出，Ａ、Ｂ培養(yǎng)基誘導(dǎo)出芽最多，Ｃ、Ｄ、Ｅ培養(yǎng)基??則誘導(dǎo)出芽較少。如表２－１３統(tǒng)計Ａ培養(yǎng)基出芽率為６７．８％，出芽率最高；其次為Ｂ培??養(yǎng)基，出芽率為６２．２％；?Ｃ培養(yǎng)基出芽率最低，為３６．７％；?Ｄ、Ｅ培養(yǎng)基出芽率有所升??高，分別為４２．２％和４６．７％。因此Ｚｔ?０．５?ｍｇ／Ｌ＋?ＩＡＡ?０．］?ｍｇ／Ｌ為＃／型番茄下胚軸誘導(dǎo)??生芽最佳激素配比。??子葉與下胚軸相比在２１０．５：１１§幾＋１八八０．１〇＾幾激素配比下出芽率更高，同時由于??下胚軸在離體時需用刀處理，且需在濾紙上操作，較易污染，且據(jù)其他關(guān)于番茄遺傳轉(zhuǎn)??化研究表明，下胚軸在篩選處理時，假陽性較高，因此本試驗后續(xù)試驗采取子葉作為外??植體。??■＾丄?ｊｉ??圖２－２?Ｚｔ與ＩＡＡ濃度誘導(dǎo)番茄下胚軸生芽??表２－１３?Ｚｔ與１ＡＡ濃度對番前下胚軸誘導(dǎo)生芽的影響??激素濃度（ｍｇ／Ｌ）?下胚軸數(shù)（個）?出芽數(shù)（個）?出芽率（％）￣???Ｚｔ?ＩＡＡ???０５?ＯＡ?９０?６１?６７．８??Ｂ?１?０．１?９０?５６?６２．２??Ｃ?１．５?０．１?９０?３３?３６．７??Ｄ?２?０．１?９０?３８?４２．２???Ｅ?Ｚ５?ＯＡ?９０?４２?４６．７??２．４．１．２卡那霉素濃度對外植體生長狀況的影響??卡那霉素屬于氨基糖苷類抗生素，它可以有效篩選轉(zhuǎn)基因番茄幼苗，采用的卡那霉??素濃度過高會

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3359880