本文探索了嗜熱酸性普魯蘭水解酶ⅢTk-PUL在枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)中的高效分泌表達條件,并對重組Tk-PUL的酶學性質(zhì)進行了初步研究。通過構(gòu)建Tk-PUL分泌表達信號肽篩選庫,并結(jié)合高通量篩選方法,確定引導Tk-PUL在枯草芽孢桿菌中高效分泌表達的信號肽。結(jié)果表明,在信號肽AmyE的引導下,重組Tk-PUL在枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)中高效分泌表達。Tk-PUL屬于單結(jié)構(gòu)域雙功能酶,同時具有α-淀粉酶活性和普魯蘭酶活性。重組Tk-PUL的α-淀粉酶活性的最適反應(yīng)pH為4.5,最適反應(yīng)溫度為100℃,對應(yīng)的絕對酶活為54.08 U/mg,于100℃的半衰期約為2 h。重組Tk-PUL的普魯蘭酶活性的最適反應(yīng)pH為4.5,最適反應(yīng)溫度為100℃,對應(yīng)的絕對酶活為110.39 U/mg,于100℃的半衰期約為2 h。本研究為Tk-PUL在淀粉酶法制糖工業(yè)中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：食品工業(yè)科技. 2020,41(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 分子克隆技術(shù)和表達產(chǎn)物的聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析
        1.2.2 Tk-PUL分泌表達信號肽篩選庫的構(gòu)建
        1.2.3 Tk-PUL分泌表達信號肽篩選庫的高通量培養(yǎng)
        1.2.4 α-淀粉酶活性和普魯蘭酶活性的高通量檢測
        1.2.5 Tk-PUL分泌表達信號肽的鑒定
        1.2.6 Tk-PUL在枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)中的分泌表達和純化
        1.2.7 Tk-PUL的酶學性質(zhì)分析
            1.2.7.1 α-淀粉酶活性測定和普魯蘭酶活性測定
            1.2.7.2 酶的最適反應(yīng)pH測定
            1.2.7.3 酶的最適反應(yīng)溫度測定
            1.2.7.4 酶的熱穩(wěn)定性測定
            1.2.7.5 酶的動力學常數(shù)測定
    1.3 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 Tk-PUL分泌表達信號肽篩選庫的高通量篩選
    2.2 Tk-PUL分泌表達信號肽的鑒定
    2.3 重組Tk-PUL的分泌表達與純化
    2.4 重組Tk-PUL的酶學性質(zhì)研究
        2.4.1 pH對重組Tk-PUL相對酶活的影響
        2.4.2 溫度對重組Tk-PUL的α-淀粉酶比活力和普魯蘭酶比活力的影響
        2.4.3 重組Tk-PUL的熱穩(wěn)定性
        2.4.4 重組Tk-PUL的動力學參數(shù)
3 結(jié)論



本文編號：3360030