發(fā)布時(shí)間：2021-08-21 02:54

　　以曼氏無(wú)針烏賊（Sepiella japonica）為研究對(duì)象,通過絕對(duì)定量技術(shù)建立和優(yōu)化了舟山近海高濁度水樣環(huán)境DNA（Environmental DNA, eDNA）的獲取方法。研究結(jié)果如下:（1）同體積水樣采用乙醇沉淀法獲得的eDNA產(chǎn)量是濾膜抽濾法的1.76—2.53倍,但在實(shí)際應(yīng)用中由于受到采樣體積、處理方式、配套設(shè)備的限制,乙醇沉淀法難以發(fā)揮出優(yōu)勢(shì);（2）濾網(wǎng)對(duì)泥沙等雜質(zhì)無(wú)過濾作用,添加濾網(wǎng)并不能過濾掉泥沙及增加抽濾體積;（3）濾膜孔徑的大小對(duì)少量水樣的eDNA產(chǎn)量有很大影響,但對(duì)大體積水樣eDNA的產(chǎn)量無(wú)影響;（4）水樣靜置處理有可能會(huì)增大eDNA產(chǎn)量,但也有可能會(huì)增大eDNA結(jié)果的波動(dòng)性,使生物量評(píng)估結(jié)果誤差較大;（5）陽(yáng)離子表面活性劑對(duì)eDNA降解有明顯的抑制作用;（6）去膜法效果優(yōu)于碎膜法,建議使用去膜法進(jìn)行eDNA消化,使用時(shí)增加離心時(shí)間;（7）酚抽除沙法雖然不能提高eDNA產(chǎn)量,但能明顯提高產(chǎn)物純度。研究首次建立了舟山近海水樣大生物eDNA最適獲取方法,為相似水域的水樣采集及eDNA提取提供了借鑒參考。 

【文章來(lái)源】：水生生物學(xué)報(bào). 2020,44(01)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

乙醇沉淀法與濾膜抽濾法結(jié)果比較

三種濾膜在抽濾50 mL水樣時(shí),在抽濾時(shí)間上存在極顯著差別(F=43.35,P=0.0003);但抽濾150及300 mL水樣時(shí),在抽濾時(shí)間上卻不存在顯著差異。孔徑0.22、0.45和0.70μm的三種濾膜的eDNA產(chǎn)量在50及150 mL兩組上分別存在極顯著及顯著差異(F=33.09,P=0.0006;F=5.51,P=0.044),但在300 mL組上無(wú)差異(F=1.72,P=0.257)。小體積水樣采集時(shí),濾膜孔徑的大小對(duì)eDNA產(chǎn)量有很大影響,此時(shí)應(yīng)選擇孔徑較小的濾膜進(jìn)行抽濾;大體積水樣采集時(shí),濾膜孔徑的大小對(duì)e DNA產(chǎn)量無(wú)影響(表3、圖3)。2.4 靜置時(shí)間對(duì)eDNA產(chǎn)量的影響

去膜法效果優(yōu)于碎膜法(圖6)。碎膜法(a組)與去膜法(b-1組、b-2組和b-3組)的eDNA產(chǎn)量(均值±標(biāo)準(zhǔn)差)分別為:(1290±273)、(1258±177)、(1494±244)和(1941±241)copies/μL。One-way ANOVA結(jié)果顯示:四組間差異極顯著(F=60.90,P=0.0009)。離心時(shí)間對(duì)去膜法eDNA產(chǎn)量有顯著影響。1min的離心處理效果與碎膜法結(jié)果無(wú)區(qū)別(a組與b-1組:F=8.45,P=0.1008)。隨著離心時(shí)間的增大,b-2組與b-3組的eDNA產(chǎn)量顯著增大,與b-1組存在顯著差異(F=51.58,P=0.0048)。使用去膜法進(jìn)行eDNA處理時(shí),應(yīng)增加離心時(shí)間,使濾膜上的eDNA充分下沉到混合物中。圖4 靜置時(shí)間對(duì)eDNA獲取的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3354741