�；o酶A結(jié)合蛋白是一類含有酰基輔酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域ACB的蛋白,參與脂質(zhì)合成和分解、酰基輔酶A穩(wěn)態(tài)等多種生理過程。類萌發(fā)素蛋白GLP是一類具有cupin結(jié)構(gòu)域的種子萌發(fā)標(biāo)記蛋白。它以酶、結(jié)構(gòu)蛋白和受體的形式參與多種生理生化過程。這兩類蛋白在植物的生長發(fā)育、生物和非生物脅迫應(yīng)答中起重要的作用,但在鹽堿應(yīng)答過程中的作用機(jī)制未見報道。星星草是一種耐鹽堿能力極強(qiáng)的鹽生單子葉植物,是研究植物鹽堿應(yīng)答機(jī)制的理想材料。本研究利用生物信息學(xué)手段和分子遺傳學(xué)技術(shù)從星星草中分別克隆到PutACBP6和PutGLP2基因。PutACBP6開放閱讀框為161bp,編碼536個氨基酸,隸屬于ABPⅢI亞類,包含1個信號肽和1個ACB結(jié)構(gòu)域。RT-qPCR分析表明PutACBP6在星星草根、莖、葉、葉鞘、花、穗和種子均有表達(dá),在星星草根、花、穗中表達(dá)較高,在種子中表達(dá)最低。逆境脅迫下（200 mmol/L NaCl、100 mmol/L NaHC03、75mmol/L Na2C03、10 mmol/L H202和4℃）,根和葉中的PutA,CBP6均呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá),暗示PutACBP6可能參與了鹽、堿、氧化、低溫脅迫... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

多種植物CLp氮基酸序列比對1671

３－１?）。利用ＴＡＫＡＲＡ?ＲＡＣＥ試劑盒合成５’ＲＡＣＥ?ｃＤＮＡ及３’ＲＡＣＥ?ｃＤＮＡ，根據(jù)己知序列設(shè)計??ＲＡＣＥ引物（表２－１），利用ＲＡＣＥ技術(shù)經(jīng)兩輪巢式ＰＣＲ擴(kuò)增獲得符合的ＰＷＬ４Ｃ５Ｐ６的５’端和??３’端片段（圖３－２），進(jìn)行測序。用ＤＮＡＭＡＮ將測序結(jié)果與已知序列進(jìn)行拼接，獲得全序??列。將該序列翻譯后進(jìn)行ＮＣＢＩ?ＢＬＡＳＴＰ比對，確定測序結(jié)果為ＰＷＬ４ＣＡＰ６。根據(jù)確定的??序列ＯＲＰ設(shè)計引物Ａ６－Ｆ、Ａ６－Ｒ?（表２－１），對其進(jìn)行克隆（圖３－３）。??圖３－１星星草根和葉總ＲＮＡ鑒定??１：星星草葉片ＲＮＡ；?２：星星草根部ＲＮＡ??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｉｎ?ｒｏｏｔ?ａｎｄ?ｌｅａｖｅｓ?ｏｆ?Ｐｕｃｃｉｎｅｌｌｉａ?ｔｅｎｕｉｆｌｏｒａ??１：?ｔｈｅ?ＲＮＡ?ｏｆ?ｌｅａｆ?＆ｏｍ?Ｐｕｃｃｉｎｅｌｌｉａ?ｔｅｎｕｉｆｌｏｒａ，?２：?ｔｈｅ?ＲＮＡ?ｏｆ?ｒｏｏｔ?ｆｒｏｍ?Ｐｕｃｃｉｎｅｌｌｉａ?ｔｅｎｕｉｆｌｏｒａ??Ａ?Ｍ?１?Ｂ?Ｍ?１?Ｃ?Ｍ?１?２?３?４??＿??ｍｍ４?１??瞧ｆ靜．．邏??圖?３－２?５’ＲＡＣＥ?及?３’ＲＡＣＥ?巢式?ＰＣＲ??（Ａ）以５’ｒａｃｅｌ和Ａ６－５１為引物進(jìn)行ＰＣＲ的結(jié)果，Ｍ：?ＤＬ２０００，１：?ＰＣＲ結(jié)果（Ｂ）以??５’ｒａｃｅ２和Ａ６－５２為引物進(jìn)行ＰＣＲ的結(jié)果，Ｍ：?ＤＬ１５０００，１：?ＰＣＲ結(jié)果（Ｃ）分別以Ｑ〇、??ＡｅＧＳＰｊＨＱｉ、Ａ６ＧＳＰ２?為引物進(jìn)行?ＰＣＲ?的結(jié)果，Ｍ：?ＤＬ２０００，?１、２：?Ｑ〇?和人６０８卩１的？〇１??結(jié)果

Ｍ：?ＤＬ２０００；?１－２：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｏｆ?ＰｕｔＡＣＢＰ６?ｇｅｎｅ??對測序結(jié)果分析表明，星星草基因開放讀碼框長度為１６１１?ｂｐ，編碼５３６個氨??基酸，含有一個ＡＣＢＰ結(jié)構(gòu)域（圖３－４）。對其編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，ＰｕｔＡＣＢＰ６分子??式為Ｃ２４６９Ｈ３９４８Ｎ６９２０?８４８Ｓ９，蛋白質(zhì)分子量為５７．１８３?ｋＤａ，等電點為４．４５，酸性氨基酸（天冬氨??酸和谷氨酸）１０７個，堿性氨基酸（精氨酸和賴氨酸）５０個，是一種酸性蛋白質(zhì)，不穩(wěn)定指??數(shù)為５１．０５，推測ＰｕｔＡＣＢＰ６是一種不穩(wěn)定蛋白，氨基酸親水性平均值（Ｇｒａｎｄ?ａｖｅｒａｇｅ?ｏｆ??矽（１１＾３沉（：辦，０１１＾丫）為－０．５１３，表明其為親水性蛋白。利用８０？１＾八對？過０１＾２的二級??結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，蛋白二級結(jié)構(gòu)主要由無規(guī)卷曲（ｒａｎｄｏｍ?ｃｏｉｌ）?（３５．６３％）、ａ螺旋（ａ－ｈｅｌｉｘ）??（５２．２４％）、延伸鏈（ｅｘｔｅｎｄｅｄ?ｃｈａｉｎ）?（８．７７％）和?ｐ?轉(zhuǎn)角（Ｐ－ｔｕｍ）?（３．３６％）組成（圖?３－??５）?．ＰｕｔＡＣＢＰ６具有一個氨基端信號肽，在第２８位天冬酰胺處被剪切（圖３－６）。??Ｂｌａｓｔ分析，發(fā)現(xiàn)與二穗短柄草序列相似性最高，??約為６４％


本文編號：3354423