發(fā)育中的神經(jīng)回路在趨向成熟的過(guò)程中會(huì)經(jīng)歷精細(xì)化,包括新的突觸產(chǎn)生、存在的突觸消除,這些變化稱為突觸重塑,它們促使神經(jīng)系統(tǒng)成為高效的功能性網(wǎng)絡(luò),而目前對(duì)突觸重塑的分子細(xì)胞機(jī)理所知有限。秀麗隱桿線蟲（C.elegans）的DD類型GABA運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元具有顯著的突觸重塑過(guò)程。在線蟲的L1時(shí)期,DD神經(jīng)元的突觸存在于腹側(cè)分支,其背側(cè)分支具有樹突功能。隨著發(fā)育進(jìn)行,DD神經(jīng)元在L1末期從其背側(cè)分支形成突觸,同時(shí)早期的腹側(cè)突觸逐漸消除。我們借助DD神經(jīng)元這種突觸重塑現(xiàn)象來(lái)探索突觸重塑的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)室前期研究表明髓鞘轉(zhuǎn)錄因子MYRF家族蛋白myrf-1和myrf-2對(duì)突觸重塑具有關(guān)鍵的促進(jìn)功能。全長(zhǎng)MYRF是個(gè)跨膜蛋白,它能夠被剪切而釋放N端入核。通過(guò)免疫沉淀和質(zhì)譜分析,鑒別出另一跨膜蛋白PAN-1能與MYRF結(jié)合,并發(fā)現(xiàn)PAN-1對(duì)于突觸重塑必不可少。遺傳互作分析表明myrf是pan-1的下游基因。但PAN-1和MYRF的互作意味著什么、PAN-1缺失如何影響MYRF的功能、對(duì)DD神經(jīng)元的突觸重塑產(chǎn)生何種影響?本論文就這些問(wèn)題的機(jī)制進(jìn)行了探究。通過(guò)分析由CRISPR構(gòu)建的PAN-1::GFP敲入品... 

【文章來(lái)源】：杭州師范大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1：圖示6個(gè)DD型GABA運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的位置和形態(tài)，也顯示突觸前和突觸后成分的重

圖 1.2rf-1, myrf-2 對(duì)線蟲 DD 神經(jīng)元突觸重塑調(diào)控機(jī)制模式圖[39]實(shí)驗(yàn)室在 2017 年雜志發(fā)表的文章里，揭示了髓鞘調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄,myrf-2 在神經(jīng)元重塑過(guò)程中起重要的調(diào)節(jié)作用。分析表明 mallele 表型，發(fā)現(xiàn)不管是 myrf-1(0)還是 myrf-2(0)，他們 DD正常的，但當(dāng)把兩個(gè)突變雜交到一起的時(shí)候，他們的 DD 神受抑制的表型。MYRF 蛋白質(zhì)全長(zhǎng)在定位的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，結(jié)構(gòu)域，能夠被絲氨酸-賴氨酸二分體結(jié)構(gòu)識(shí)別，并對(duì) MY之后分為游離的 N 端和留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的 C 端。剪切下來(lái)序列和 DNA 結(jié)合域，緊接著，N 端入核，與調(diào)控 DD 神經(jīng)互作用，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄[39]。模式圖見圖 1.2。1對(duì)DD神經(jīng)元突觸重塑必不可少

傳互作分析表明 myrf 是 pan-1 的下游基因（王超，夏詩(shī)麗，未發(fā)表）。但 PAN-1和 MYRF 的互作意味著什么、PAN-1 缺失如何影響 MYRF 的功能、對(duì) DD 神經(jīng)元的突觸重塑產(chǎn)生何種影響？本論文就這些問(wèn)題的機(jī)制進(jìn)行了探究。4.1 PAN-1的定位4.1.1 pan-1熒光標(biāo)簽品系的構(gòu)建通過(guò) CRISPR-Cas9 技術(shù)，我們實(shí)驗(yàn)室之前成功實(shí)現(xiàn)了 pan-1 基因中 GFP 的敲入。其對(duì)應(yīng)品系號(hào)為 BLW1258。4.1.2 PAN-1b::GFP定位于細(xì)胞膜上和細(xì)胞質(zhì)中將上述實(shí)驗(yàn)室之前構(gòu)建好的內(nèi)源表達(dá)的 PAN-1b::GFP 線蟲品系進(jìn)行拍照觀察，它的結(jié)果如圖 4.1 所示：PAN-1b::GFP


本文編號(hào)：3354893