m 6 A修飾對(duì)小鼠小腦發(fā)育的調(diào)控作用研究
發(fā)布時(shí)間：2021-08-20 16:48
m6A是一種在mRNA和非編碼RNAs中廣泛存在的,動(dòng)態(tài)且可逆的甲基化修飾。在神經(jīng)發(fā)育以及神經(jīng)環(huán)路形成等過程中m6A修飾發(fā)揮著調(diào)控作用。但是,現(xiàn)進(jìn)行的研究主要是對(duì)m6A的甲基化修飾酶“writers（刻寫器）”和去甲基化修飾酶“erasers（擦除器）”的研究,而對(duì)m6A修飾的識(shí)別和結(jié)合蛋白“readers（閱讀器）”的研究很少,具體在m6A修飾調(diào)控小腦發(fā)育的研究中,其readers的功能和機(jī)制目前還未見報(bào)道。本課題利用神經(jīng)系統(tǒng)特異性表達(dá)的Nestin-cre敲除m6A的writer METTL14,發(fā)現(xiàn)METTL14敲除后的小鼠體型明顯變小,小腦萎縮。鑒于敲除writer后導(dǎo)致嚴(yán)重的小腦發(fā)育缺陷,說明m6A修飾對(duì)于小腦發(fā)育至關(guān)重要。我們分別在小腦的兩類主要神經(jīng)元即浦肯野細(xì)胞和顆粒細(xì)胞中分別研究m6A修飾,本課題主要集中研究m6A修飾對(duì)浦肯野細(xì)胞發(fā)育和功能的調(diào)控作用和機(jī)制。本課題利用Rosa...
【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校
【文章頁數(shù)】：80 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
RosamT/mG小鼠在Cre陽性細(xì)胞中表達(dá)GFP的機(jī)制[86]
哈爾濱工業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文-19-3.2L7-cre表達(dá)譜確定實(shí)驗(yàn)方法（1）交配鑒定將L7-cre+/-小鼠與異性Rosa26mT/mG基因型小鼠交配，取不同時(shí)期的cre陽性和cre陰性小鼠。（2）切片觀察P0開始鑒定觀察，通過小鼠灌流固定，脫水，包埋，切片后，直接加DAPI封閉不需要孵抗體，直接可以直接在熒光顯微鏡下觀察，一直至觀察到cre陽性有GFP表達(dá)，同時(shí)對(duì)照cre陰性為無GFP表達(dá)，并且在其后的幾個(gè)時(shí)期也都有GFP表達(dá)，則第一次觀察到的時(shí)期即為L(zhǎng)7-cre的表達(dá)時(shí)間。3.3L7-cre表達(dá)譜確定結(jié)果如圖3-2所示，綠色通道是GFP表達(dá)，藍(lán)色通道是DAPI標(biāo)記細(xì)胞核，Merge是兩個(gè)通道的合并，發(fā)現(xiàn)在P0時(shí)期cre陽性GFP就已經(jīng)開始表達(dá)，同窩小鼠cre陰性作為對(duì)照沒有GFP表達(dá)。3.4Pcp2-cre表達(dá)譜確定實(shí)驗(yàn)方法（1）交配鑒定將Pcp2-cre+/-基因型小鼠與異性Rosa26mT/mG基因型小鼠交配，取不同時(shí)期的cre陽性和cre陰性小鼠分析。圖3-2L7-cre+/-,Rosa26mT/mG小鼠小腦GFP表達(dá)結(jié)果圖（圖中scalebar為200μm）
哈爾濱工業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文-20-（2）切片觀察P0開始觀察，通過收集小鼠灌流固定，脫水，包埋，切片后，直接加DAPI封閉液指甲油封片不需要孵抗體，直接可以直接在熒光共聚焦顯微鏡下觀察，一直至觀察到cre陽性有GFP表達(dá)，同時(shí)對(duì)照cre陰性為無GFP表達(dá)，并且在其后的幾個(gè)時(shí)期也都有GFP表達(dá)，則第一次觀察到的時(shí)期即為Pcp2-cre的表達(dá)時(shí)間。3.5Pcp2-cre表達(dá)譜確定結(jié)果如圖3-3所示，Pcp2-cre+/-與異性Rosa26mT/mG小鼠交配，收集P5、P7和P8，可以看到P5野生型和cre陽性都還未表達(dá)GFP，在P7時(shí)才開始表達(dá)GFP，同窩小鼠cre陰性作為對(duì)照沒有GFP表達(dá)，P8時(shí)期陽性表達(dá)GFP，同窩小鼠陰性對(duì)照不表達(dá)GFP。Pcp2-cre表達(dá)最早在P7，晚于L7-cre表達(dá)時(shí)期，但是由于L7/Pcp2是同一個(gè)基因，只是cre插入的外顯子不同，所以我們也對(duì)Pcp2-cre進(jìn)行了分析。3.6本章小結(jié)本章主要是確定了在浦肯野細(xì)胞中特異性表達(dá)的cre的表達(dá)時(shí)間，本章實(shí)驗(yàn)選擇了能夠在小鼠小腦浦肯野細(xì)胞中特異性表達(dá)的L7-cre和Pcp2-cre，利用Rosa26mT/mG報(bào)告基因鼠與L7-cre和Pcp2-cre小鼠雜交，表達(dá)GFP來確定在小鼠小腦中的表達(dá)譜，研究后發(fā)現(xiàn)L7-cre最早表達(dá)是在P0時(shí)期，而Pcp2-cre最早表達(dá)是圖3-3Pcp2-cre+/-,Rosa26mT/mG小鼠小腦GFP表達(dá)結(jié)果圖（圖中scalebar為200μm）
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang. Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)
本文編號(hào)：3353862
【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校
【文章頁數(shù)】：80 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
RosamT/mG小鼠在Cre陽性細(xì)胞中表達(dá)GFP的機(jī)制[86]
哈爾濱工業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文-19-3.2L7-cre表達(dá)譜確定實(shí)驗(yàn)方法（1）交配鑒定將L7-cre+/-小鼠與異性Rosa26mT/mG基因型小鼠交配，取不同時(shí)期的cre陽性和cre陰性小鼠。（2）切片觀察P0開始鑒定觀察，通過小鼠灌流固定，脫水，包埋，切片后，直接加DAPI封閉不需要孵抗體，直接可以直接在熒光顯微鏡下觀察，一直至觀察到cre陽性有GFP表達(dá)，同時(shí)對(duì)照cre陰性為無GFP表達(dá)，并且在其后的幾個(gè)時(shí)期也都有GFP表達(dá)，則第一次觀察到的時(shí)期即為L(zhǎng)7-cre的表達(dá)時(shí)間。3.3L7-cre表達(dá)譜確定結(jié)果如圖3-2所示，綠色通道是GFP表達(dá)，藍(lán)色通道是DAPI標(biāo)記細(xì)胞核，Merge是兩個(gè)通道的合并，發(fā)現(xiàn)在P0時(shí)期cre陽性GFP就已經(jīng)開始表達(dá)，同窩小鼠cre陰性作為對(duì)照沒有GFP表達(dá)。3.4Pcp2-cre表達(dá)譜確定實(shí)驗(yàn)方法（1）交配鑒定將Pcp2-cre+/-基因型小鼠與異性Rosa26mT/mG基因型小鼠交配，取不同時(shí)期的cre陽性和cre陰性小鼠分析。圖3-2L7-cre+/-,Rosa26mT/mG小鼠小腦GFP表達(dá)結(jié)果圖（圖中scalebar為200μm）
哈爾濱工業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文-20-（2）切片觀察P0開始觀察，通過收集小鼠灌流固定，脫水，包埋，切片后，直接加DAPI封閉液指甲油封片不需要孵抗體，直接可以直接在熒光共聚焦顯微鏡下觀察，一直至觀察到cre陽性有GFP表達(dá)，同時(shí)對(duì)照cre陰性為無GFP表達(dá)，并且在其后的幾個(gè)時(shí)期也都有GFP表達(dá)，則第一次觀察到的時(shí)期即為Pcp2-cre的表達(dá)時(shí)間。3.5Pcp2-cre表達(dá)譜確定結(jié)果如圖3-3所示，Pcp2-cre+/-與異性Rosa26mT/mG小鼠交配，收集P5、P7和P8，可以看到P5野生型和cre陽性都還未表達(dá)GFP，在P7時(shí)才開始表達(dá)GFP，同窩小鼠cre陰性作為對(duì)照沒有GFP表達(dá)，P8時(shí)期陽性表達(dá)GFP，同窩小鼠陰性對(duì)照不表達(dá)GFP。Pcp2-cre表達(dá)最早在P7，晚于L7-cre表達(dá)時(shí)期，但是由于L7/Pcp2是同一個(gè)基因，只是cre插入的外顯子不同，所以我們也對(duì)Pcp2-cre進(jìn)行了分析。3.6本章小結(jié)本章主要是確定了在浦肯野細(xì)胞中特異性表達(dá)的cre的表達(dá)時(shí)間，本章實(shí)驗(yàn)選擇了能夠在小鼠小腦浦肯野細(xì)胞中特異性表達(dá)的L7-cre和Pcp2-cre，利用Rosa26mT/mG報(bào)告基因鼠與L7-cre和Pcp2-cre小鼠雜交，表達(dá)GFP來確定在小鼠小腦中的表達(dá)譜，研究后發(fā)現(xiàn)L7-cre最早表達(dá)是在P0時(shí)期，而Pcp2-cre最早表達(dá)是圖3-3Pcp2-cre+/-,Rosa26mT/mG小鼠小腦GFP表達(dá)結(jié)果圖（圖中scalebar為200μm）
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang. Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)
本文編號(hào)：3353862
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