氮素是生物體內(nèi)蛋白質(zhì)、氨基酸等多種物質(zhì)的組成部分,也是植物生長最重要的礦質(zhì)元素之一,被稱為生命元素,植物可吸收利用的主要氮源是銨態(tài)氮和硝態(tài)氮。目前,農(nóng)作物生長過程中普遍存在氮素利用率較低,大量施用氮肥仍是提高農(nóng)作物產(chǎn)量的主要手段。研究表明,過多施用氮肥可導(dǎo)致作物抗逆能力下降、土壤結(jié)構(gòu)破壞以及水體污染等。因此,開展氮素高效利用作物種質(zhì)創(chuàng)新已成為提高氮素利用率的重要途徑。核桃（Juglans regia L.）為世界最重要“四大堅果”之一,為國家木本油料發(fā)展戰(zhàn)略樹種。本論文以核桃為研究對象,開展了核桃銨轉(zhuǎn)運蛋白（AMT,ammonium transporter）基因克隆、過表達(dá)載體構(gòu)建,同源轉(zhuǎn)化核桃體細(xì)胞胚等研究,以期獲得生長良好的核桃銨態(tài)氮高效利用再生植株。本研究的主要研究結(jié)果如下:（1）成功克隆核桃JrAMT基因、構(gòu)建過量表達(dá)載體并開展了亞細(xì)胞定位分析通過同源克隆法成功克隆了核桃JrAMT基因全長cDNA,進(jìn)行生物信息分析結(jié)果表明,該基因長度為1464bp,經(jīng)過NCBI在線序列比對顯示該基因的序列編碼的氨基酸序列屬于Ammonium Transporter Family。該基因編碼的蛋... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

表達(dá)載體pCAMBIA1300-GFP的酶切圖譜

轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌具體操作步驟Figure2.2SpecificstepsfortransformationofAgrobacterium

其中體胚的濃度為280.1ng/μL，體胚的 OD260/OD280=1.98，其濃度和質(zhì)量達(dá)到反轉(zhuǎn)錄的要求（圖2.3）。圖 2.3 核桃體胚總 RNA 凝膠電泳圖泳道 1-2 為核桃體胚提取 RNA。Figure2.3 Gel electrophoresis of total RNA of walnut somatic embryosLane 1-2 indicates walnut somatic embryo extract RNA.2.3.2 核桃 JrAMT 基因全長擴(kuò)增以擴(kuò)增好的 cDNA 為模板，加入自己設(shè)計的上下游引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，設(shè)計退火梯度，擴(kuò)增核桃 JrAMT 基因。根據(jù)電泳顯示的條帶的亮度最終選擇 66.2℃為最佳的退火溫度，PCR 擴(kuò)增后，1%瓊脂糖凝膠電泳表明擴(kuò)增的產(chǎn)物與預(yù)期結(jié)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]銨態(tài)氮和硝態(tài)氮對谷子形態(tài)和生物量的影響研究[J]. 崔紀(jì)菡,趙靜,孟建,劉猛,趙宇,宋世佳,夏雪巖,李順國.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2017(10)
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博士論文
[1]超量表達(dá)谷氨酰胺合成酶、硝酸根轉(zhuǎn)運蛋白和銨離子轉(zhuǎn)運蛋白家族1基因?qū)λ镜x的功能研究[D]. 蔡紅梅.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]桑樹氮代謝相關(guān)基因的克隆及表達(dá)分析[D]. 錢嬌.江蘇科技大學(xué) 2016
[2]不同時期施氮對蘋果氮素吸收利用及內(nèi)源激素含量的影響研究[D]. 周樂.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
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本文編號：3340255