肝素和硫酸乙酰肝素是一類應用于臨床抗凝血的糖胺聚糖。肝素葡萄糖醛酸C5異構(gòu)酶（Heparosan-N-sulfate-glucuronate 5-epimerase,C5,EC 5.1.3.17）是肝素和硫酸乙酰肝素合成過程中重要的修飾酶,催化N-硫酸化肝素前體（N-sulfoheparosan）的D-葡萄糖醛酸（D-GlcA）上5號位羧基翻轉(zhuǎn)生成L-艾杜糖醛酸（L-iduronic acid,L-IdoA）。文中以大腸桿菌Escherichia coli為宿主對斑馬魚來源的肝素葡萄糖醛酸C5異構(gòu)酶基因Glce進行重組表達優(yōu)化與分子改造。比較了3種不同的表達載體pET20b（+）、pET28a（+）和pColdⅢ對C5表達的差異情況,其中以嗜冷啟動型載體pColdⅢ表達酶活最高,達到（1 873.61±5.42） U/L。為了進一步提高C5的可溶表達量,在N端融合促溶標簽SET2后,可溶蛋白表達量比對照提高了50%,酶活達到（2 409.25±6.43） U/L。在此基礎上,通過理性設計對底物結(jié)合口袋進行定點突變,獲得最優(yōu)突變體（V153R）的酶活和比酶活分別為（5 804.32±5.... 

【文章來源】：生物工程學報. 2020,36(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

不同載體對C5異構(gòu)酶表達的影響

肝素C5異構(gòu)酶純化及突變體酶活

肝素C5異構(gòu)酶突變體結(jié)構(gòu)分析

【參考文獻】：
期刊論文
[1]肝素硫酸轉(zhuǎn)移酶優(yōu)化表達及其在動物源肝素硫酸化中的應用[J]. 周正雄,王兵兵,胥睿睿,李青,堵國成,康振.  生物工程學報. 2018(11)



本文編號：3327450