貝伐珠單抗是一種單克隆抗體,在腫瘤和黃斑變性的治療中發(fā)揮著重要作用,具有很高的醫(yī)學(xué)價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用前景。本課題組已經(jīng)構(gòu)建并篩選出一株穩(wěn)定表達(dá)貝伐珠單抗的重組中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（recombinant Chinese hamster ovary,r CHO）細(xì)胞,本文計(jì)劃對(duì)該細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)工藝研究,并對(duì)該細(xì)胞株培養(yǎng)過(guò)程存在的問(wèn)題進(jìn)行研究和探討。首先通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)初步篩選出適合該重組CHO細(xì)胞的5個(gè)培養(yǎng)參數(shù),包括初始活細(xì)胞密度（initial viable cell density,IVCD）、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、變溫活細(xì)胞密度（shift VCD）和補(bǔ)料培養(yǎng)基,結(jié)果顯示基礎(chǔ)培養(yǎng)基存在乳酸累積現(xiàn)象,因此進(jìn)一步通過(guò)調(diào)整補(bǔ)料方式和添加銅離子對(duì)乳酸代謝進(jìn)行調(diào)控,最終確定當(dāng)銅離子添加濃度為120μg/L,補(bǔ)料策略為d3～d14補(bǔ)料量維持第二天殘?zhí)撬綖? g/L最有利于細(xì)胞生長(zhǎng)代謝和抗體產(chǎn)物表達(dá)。此外,本文采用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（全因子設(shè)計(jì)和中心復(fù)合設(shè)計(jì)）和響應(yīng)面分析的方法,優(yōu)化了重組貝伐珠單抗的細(xì)胞培養(yǎng)工藝,對(duì)最佳工藝參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證,得到最佳參數(shù)組合:初始活細(xì)胞密度0.9±0.1×10⁶

【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
summary
第一章 綜述
    1.1 單克隆抗體藥物概述
        1.1.1 單克隆抗體藥物分類(lèi)
        1.1.2 單克隆抗體藥物的應(yīng)用和發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.3 重組貝伐珠單抗
    1.2 單克隆抗體細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.1 動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
        1.2.2 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)工藝
        1.2.3 影響單抗細(xì)胞培養(yǎng)工藝特性的培養(yǎng)條件
        1.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程對(duì)抗體質(zhì)量的影響
    1.3 本文研究?jī)?nèi)容、目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 培養(yǎng)基及試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.2 細(xì)胞培養(yǎng)方法
        2.2.1 種子復(fù)蘇和細(xì)胞擴(kuò)增
        2.2.2 分批培養(yǎng)(batch)
        2.2.3 分批補(bǔ)料培養(yǎng)(fed-batch)
    2.3 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程參數(shù)檢測(cè)方法
        2.3.1 活細(xì)胞密度檢測(cè)
        2.3.2 培養(yǎng)過(guò)程參數(shù)檢測(cè)
    2.4 抗體表達(dá)量、抗體電荷異質(zhì)性及抗體糖型檢測(cè)方法
        2.4.1 抗體含量測(cè)定方法
        2.4.2 抗體電荷異質(zhì)性檢測(cè)
        2.4.3 抗體糖型檢測(cè)
    2.5 抗體表達(dá)量及抗體電荷異質(zhì)性檢測(cè)方法學(xué)驗(yàn)證
        2.5.1 抗體表達(dá)量檢測(cè)方法驗(yàn)證(Titer-HPLC)
        2.5.2 抗體電荷異質(zhì)性檢測(cè)方法驗(yàn)證(CEX-HPLC)
        2.5.3 驗(yàn)證結(jié)論
第三章 rCHO細(xì)胞生長(zhǎng)代謝及其培養(yǎng)條件篩選
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        3.2.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)條件篩選單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 不同的初始活細(xì)胞密度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        3.3.2 不同培養(yǎng)溫度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        3.3.3 變溫活細(xì)胞密度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        3.3.4 基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        3.3.5 補(bǔ)料培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
    3.4 小結(jié)
第四章 補(bǔ)料策略及銅離子對(duì)rCHO細(xì)胞代謝的影響
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果
        4.2.1 補(bǔ)料策略和銅離子對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)乳酸代謝的影響實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 DoE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及其驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
    4.3 小結(jié)
第五章 添加物對(duì)細(xì)胞抗體質(zhì)量的影響
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    5.3 結(jié)果和討論
        5.3.1 銅離子對(duì)兩種混合培養(yǎng)基(空白對(duì)照組)的細(xì)胞生長(zhǎng)代謝和抗體濃度、質(zhì)量的影響
        5.3.2 銅離子和錳離子對(duì)細(xì)胞抗體濃度和質(zhì)量的影響
        5.3.3 銅離子和錳離子對(duì)細(xì)胞抗體濃度和糖型的交互作用
        5.3.4 巖藻糖(Fucose)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和抗體濃度、糖型的影響
    5.4 小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
主要參考文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)在全人源抗體藥物研發(fā)中的應(yīng)用[J]. 王志明.  中國(guó)新藥雜志. 2016(22)
[2]金屬離子對(duì)CHO細(xì)胞抗體表達(dá)及抗體電荷分布的影響[J]. 張?chǎng)螡?唐紅萍,趙亮,范里,劉旭平,繆仕偉,譚文松.  生物技術(shù)通報(bào). 2016(08)
[3]抗體藥物在抗感染領(lǐng)域的應(yīng)用[J]. 李新穎,呂明.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2015(12)
[4]單克隆抗體藥物在腫瘤治療中的研究進(jìn)展[J]. 張敏,李佳,俞德超.  實(shí)用腫瘤雜志. 2015(06)
[5]抗腫瘤抗體藥物的研究進(jìn)展[J]. 陳雪靜,常亮,高健.  中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2015(01)
[6]重組CHO細(xì)胞培養(yǎng)條件研究[J]. 楊貝貝,徐秀麗.  生物技術(shù)世界. 2014(11)
[7]單克隆抗體人源化技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 涂少華,陶嶸,沈江帆.  國(guó)際放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)雜志. 2014 (05)
[8]核心巖藻糖基化控制在治療性抗體研究中的應(yīng)用[J]. 楊洞庭,宋淑亮,吉愛(ài)國(guó).  生命的化學(xué). 2012(02)
[9]單克隆抗體治療自身免疫性疾病的研究進(jìn)展[J]. 陳鏡宇,魏偉.  中國(guó)新藥雜志. 2011(08)
[10]常壓鹽溶液法從煙氣脫硫石膏制備硫酸鈣晶須研究[J]. 吳曉琴,裘建軍.  武漢科技大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(02)

博士論文
[1]VEGF靶向抗體研制及其促腫瘤分子機(jī)制探討[D]. 楊靜.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2014

碩士論文
[1]單克隆抗體藥物及其糖基化修飾的質(zhì)譜分析方法研究[D]. 叢宇婷.吉林大學(xué) 2016
[2]貝伐株單克隆抗體制備工藝及質(zhì)量研究[D]. 劉明力.吉林大學(xué) 2015
[3]銅離子對(duì)CHO細(xì)胞乳酸代謝影響[D]. 胡善心（HO THIEN TAM）.華東理工大學(xué) 2015
[4]N-糖基化修飾對(duì)人源化IgG抗體藥物生產(chǎn)細(xì)胞株篩選的重要性[D]. 徐云霞.南京大學(xué) 2013
[5]重組CHO細(xì)胞的無(wú)血清懸浮培養(yǎng)[D]. 張大鶴.華東理工大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3316998