哺乳動物大腦皮質(zhì)經(jīng)過正常發(fā)育最終會形成致密的六層結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)對大腦皮質(zhì)行使正常的生理功能十分重要。大腦皮質(zhì)發(fā)育異�？赡軐�(dǎo)致:癲癇,認(rèn)知功能障礙,小腦癥和巨腦癥等重大神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生的可能。大腦皮質(zhì)的發(fā)育需要經(jīng)過神經(jīng)祖細(xì)胞增殖,神經(jīng)元遷移,分化,建立突觸聯(lián)系等多項步驟協(xié)調(diào)進(jìn)行。其中,神經(jīng)元遷移是大腦皮層六層結(jié)構(gòu)形成的基礎(chǔ),新出生的神經(jīng)元越過原來產(chǎn)生的神經(jīng)元到達(dá)皮質(zhì)外層,依次形成“由內(nèi)而外”的層狀結(jié)構(gòu)。PI3-激酶神經(jīng)元酪氨酸磷酸化接頭蛋白1（neuronal tYrosine-phosphorylated adaptor for PI3-kinase 1,Nyap1）是NYAP家族（NYAPs）中的一員,該家族還包括Nyap2和Nyap3。NYAPs有一段同源區(qū)域具有保守的酪氨酸殘基和一段脯氨酸富集區(qū)域。NYAPs是大腦中主要的磷蛋白,在與PI3K相關(guān)的酪氨酸磷酸化作用中,NYAPs占據(jù)其中的四分之三。NYAPs在小鼠大腦皮質(zhì)中高度表達(dá),并且NYAPs還介導(dǎo)細(xì)胞中actin細(xì)胞骨架重塑。敲除NYAPs會使神經(jīng)元突起生長不足,大腦皮質(zhì)變薄,其中Nyap1的敲除表現(xiàn)得最為明顯。Nyap1在整... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 小鼠大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)及神經(jīng)元遷移
    1.1 小鼠大腦皮層結(jié)構(gòu)
    1.2 神經(jīng)元遷移概述
        1.2.1 神經(jīng)元遷移種類及過程
        1.2.2 神經(jīng)元多極-雙極轉(zhuǎn)換
    1.3 細(xì)胞骨架與神經(jīng)元遷移
    1.4 神經(jīng)元遷移相關(guān)信號通路
第二章 NYAP結(jié)構(gòu)及功能
    2.1 NYAPs的結(jié)構(gòu)與表達(dá)模式
    2.2 NYAP介導(dǎo)的信號通路
    2.3 NYAP介導(dǎo)Actin細(xì)胞骨架重塑
    2.4 NYAP與腦部發(fā)育
第三章 過表達(dá)Nyap1 對神經(jīng)元形態(tài)及遷移的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗動物
        3.1.2 材料與試劑
        3.1.3 Nyap1 表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        3.1.5 細(xì)胞免疫熒光染色及拍照分析
        3.1.6 子宮內(nèi)電擊轉(zhuǎn)染
        3.1.7 組織取材與切片制備
        3.1.8 組織免疫熒光染色及顯微鏡拍照
        3.1.9 統(tǒng)計分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 pCAG-Nyap1-EGFP真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 Nyap1 在真核細(xì)胞中成功表達(dá)
        3.2.3 Nyap1 對神經(jīng)元形態(tài)的影響
        3.2.4 Nyap1 對神經(jīng)元遷移的影響
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 干擾Nyap1 對神經(jīng)元形態(tài)及遷移的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗動物
        4.1.2 材料與試劑
        4.1.3 Nyap1 干擾載體構(gòu)建
        4.1.4 Nyap1-R表達(dá)載體構(gòu)建
        4.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        4.1.6 細(xì)胞免疫熒光染色及拍照分析
        4.1.7 蛋白樣品提取
        4.1.8 Western Blot
        4.1.9 子宮內(nèi)電擊轉(zhuǎn)染
        4.1.10 組織取材與切片制備
        4.1.11 組織免疫熒光染色及顯微鏡拍照
        4.1.12 統(tǒng)計分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.2 干擾表達(dá)載體在真核細(xì)胞中的表達(dá)
        4.2.3 shNyap1 敲降效果檢測
        4.2.4 抑制Nyap1 對神經(jīng)元遷移的影響
        4.2.5 抑制Nyap1 對神經(jīng)元形態(tài)的影響
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 Nyap1 磷酸化水平對神經(jīng)元形態(tài)及遷移的影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗動物
        5.1.2 材料與試劑
        5.1.3 Nyap1 突變表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        5.1.5 細(xì)胞免疫熒光染色及拍照分析
        5.1.6 子宮內(nèi)電擊轉(zhuǎn)染
        5.1.7 組織取材與切片制備
        5.1.8 組織免疫熒光染色及顯微鏡拍照
        5.1.9 統(tǒng)計分析
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 Nyap1 磷酸化突變體真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.2 Nyap1 磷酸化突變載體在真核細(xì)胞中成功表達(dá)
        5.2.3 Nyap1 磷酸化位點(diǎn)突變對神經(jīng)元遷移的影響
        5.2.4 Nyap1 磷酸化位點(diǎn)突變對神經(jīng)元形態(tài)的影響
        5.2.5 Nyap1 磷酸化完全缺失對神經(jīng)元遷移的影響
        5.2.6 Nyap1 磷酸化完全缺失對神經(jīng)元形態(tài)的影響
    5.3 討論
    5.4 小結(jié)
第六章 Fyn磷酸化Nyap1 調(diào)控神經(jīng)元遷移
    6.1 材料與方法
        6.1.1 實(shí)驗動物
        6.1.2 材料與試劑
        6.1.3 真核表達(dá)載體構(gòu)建
        6.1.4 子宮內(nèi)電擊轉(zhuǎn)染
        6.1.5 組織取材與切片制備
        6.1.6 組織免疫熒光染色及顯微鏡拍照
        6.1.7 統(tǒng)計分析
    6.2 結(jié)果
        6.2.1 超表達(dá)Nyap1 挽救shFyn導(dǎo)致的多極-雙極轉(zhuǎn)換障礙
        6.2.2 shNyap1 無法完全挽救Fyn-CA引起的神經(jīng)元遷移障礙
        6.2.3 Nyap1 磷酸化缺失無法挽救shFyn導(dǎo)致的多極-雙極轉(zhuǎn)換障礙
    6.3 討論
    6.4 小結(jié)
第七章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p85a基因?qū)π∈蟠竽X皮層投射神經(jīng)元遷移的影響[J]. 陳林華,曹華騰,涂曉萌,王教,李雪.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報. 2014(08)

博士論文
[1]Fyn的RNA干擾和重要位點(diǎn)突變對神經(jīng)元遷移的影響及分子機(jī)制[D]. 黃映雪.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[2]Fyn在神經(jīng)元遷移中的作用及分子機(jī)制研究[D]. 安磊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014



本文編號：3307976