目的:在哺乳動物生精上皮中,睪丸支持細胞（Sertoli細胞）在精子發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用。相鄰Sertoli細胞通過胞間連接形成血睪屏障（BTB）,將生精上皮分隔成與生精小管上皮基膜相近的基底小室和連接生精小管管腔的近腔小室,為精子的形成創(chuàng)造了一個免疫豁免的微環(huán)境。在生精上皮周期的VIII期,前細線期精母細胞從基底室向近腔室的遷移涉及精母細胞移行后方新BTB復(fù)合體的構(gòu)建和移行前方原有BTB復(fù)合體的分解。由Sertoli細胞和生精細胞分泌的轉(zhuǎn)化生長因子-β3（TGF-β3）已被證實能夠通過多種途徑引起B(yǎng)TB屏障功能損壞,促進生精細胞遷移,但其調(diào)控BTB屏障功能的分子機制尚未被完全闡明。本課題組前期通過基因芯片篩選出TGF-β3作用前后Sertoli細胞中差異表達的microRNAs（miRNAs）,其中miR-142-3p已被證實在多種細胞活動中參與了TGF-β介導的信號轉(zhuǎn)導通路。我們前期通過生物信息學軟件預(yù)測miR-142-3p能夠特異性結(jié)合幼蟲巨大致死性基因（Lgl）哺乳動物同源物Lgl2,推測miR-142-3p可能通過靶向Lgl2影響TGF-?3誘導的BTB屏障功能損傷。本研... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

BTB周期性變化及本研究思路示意圖

3.2 miR-142-3p 抑制 TGF-β3 誘導的大鼠原代 Sertoli 細胞屏障功能減退基于 miR-142-3p 在多種 TGF-β3 介導調(diào)控的細胞活動中發(fā)揮重要作用[19-21]，并在大鼠生精上皮周期中具有與 TGF-β3 相反的表達趨勢，我們分析了 miR-142-3p 對TGF-β3 誘導的 Sertoli 細胞屏障功能損傷的影響。我們從 20 天齡 SD 大鼠睪丸中分離提取 Sertoli 細胞，通過原代培養(yǎng)構(gòu)建體外 BTB 模型，進行 BTB 屏障功能檢測�？缟掀る娮瑁═ER）測定及熒光素鈉（Na-F）通透率檢測結(jié)果顯示：與對照組相比，TGF-β3（3 ng/ml，24 h）處理組 TER 值降低約 40%（圖 3.2A），同時 Na-F 通透率升高約 30%（圖 3.2 B），表明 TGF-β3 處理能夠誘導 Sertoli 細胞屏障功能減退。而過表達 miR-142-3p 后，經(jīng) TGF-β3 處理的 Sertoli 細胞與對照組相比 TER 值及 Na-F通透率均無明顯差異（圖 3.2），證明 miR-142-3p 過表達能夠顯著改善 TGF-β3 誘導的 Sertoli 細胞屏障功能減退。A B

中國醫(yī)科大學博士學位論文子[7]，為了進一步了解 miR-142-3p 拮抗 TGF-β3 誘導的 Sertoli 細胞屏障功能減退的作用機制，我們采用免疫沉淀檢測了各組細胞 Cdc42 的活性水平。結(jié)果顯示：TGF-β3處理對 Cdc42 具有明顯的激活作用，即其活性形式 Cdc42-GTP 的水平明顯增高；而過表達 miR-142-3p 后，經(jīng) TGF-β3 處理的 Sertoli 細胞中 Cdc42-GTP 的水平與對照組相比無明顯變化（圖 3.3 A、B）。同時，我們檢測了各組 Sertoli 細胞中緊密連接蛋白 occludin 的表達水平。免疫印跡及免疫熒光結(jié)果均顯示：與對照組相比，TGF-β3 處理組 occludin 表達水平顯著下降；而過表達 miR-142-3p 后再經(jīng) TGF-β3處理的 Sertoli 細胞中，occludin 表達水平與對照組相比無明顯變化；并且單獨過表達 miR-142-3p 的 Sertoli 細胞中 occludin 表達水平與對照組相比有所升高（圖 3.3）。以上結(jié)果表明 miR-142-3p 在體外 BTB 模型中能夠抑制 TGF-β3 誘導的大鼠原代Sertoli 細胞屏障功能減退。AC


本文編號：3300554