TGF-β3通過(guò)Lgl2調(diào)節(jié)大鼠血睪屏障及睪丸支持細(xì)胞乳酸分泌功能的機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-07-24 11:21
目的:在哺乳動(dòng)物生精上皮中,睪丸支持細(xì)胞（Sertoli細(xì)胞）在精子發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。相鄰Sertoli細(xì)胞通過(guò)胞間連接形成血睪屏障（BTB）,將生精上皮分隔成與生精小管上皮基膜相近的基底小室和連接生精小管管腔的近腔小室,為精子的形成創(chuàng)造了一個(gè)免疫豁免的微環(huán)境。在生精上皮周期的VIII期,前細(xì)線期精母細(xì)胞從基底室向近腔室的遷移涉及精母細(xì)胞移行后方新BTB復(fù)合體的構(gòu)建和移行前方原有BTB復(fù)合體的分解。由Sertoli細(xì)胞和生精細(xì)胞分泌的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β3（TGF-β3）已被證實(shí)能夠通過(guò)多種途徑引起B(yǎng)TB屏障功能損壞,促進(jìn)生精細(xì)胞遷移,但其調(diào)控BTB屏障功能的分子機(jī)制尚未被完全闡明。本課題組前期通過(guò)基因芯片篩選出TGF-β3作用前后Sertoli細(xì)胞中差異表達(dá)的microRNAs（miRNAs）,其中miR-142-3p已被證實(shí)在多種細(xì)胞活動(dòng)中參與了TGF-β介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。我們前期通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-142-3p能夠特異性結(jié)合幼蟲(chóng)巨大致死性基因（Lgl）哺乳動(dòng)物同源物L(fēng)gl2,推測(cè)miR-142-3p可能通過(guò)靶向Lgl2影響TGF-?3誘導(dǎo)的BTB屏障功能損傷。本研...
【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
BTB周期性變化及本研究思路示意圖
3.2 miR-142-3p 抑制 TGF-β3 誘導(dǎo)的大鼠原代 Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退基于 miR-142-3p 在多種 TGF-β3 介導(dǎo)調(diào)控的細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮重要作用[19-21]，并在大鼠生精上皮周期中具有與 TGF-β3 相反的表達(dá)趨勢(shì)，我們分析了 miR-142-3p 對(duì)TGF-β3 誘導(dǎo)的 Sertoli 細(xì)胞屏障功能損傷的影響。我們從 20 天齡 SD 大鼠睪丸中分離提取 Sertoli 細(xì)胞，通過(guò)原代培養(yǎng)構(gòu)建體外 BTB 模型，進(jìn)行 BTB 屏障功能檢測(cè)�？缟掀る娮瑁═ER）測(cè)定及熒光素鈉（Na-F）通透率檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，TGF-β3（3 ng/ml，24 h）處理組 TER 值降低約 40%（圖 3.2A），同時(shí) Na-F 通透率升高約 30%（圖 3.2 B），表明 TGF-β3 處理能夠誘導(dǎo) Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退。而過(guò)表達(dá) miR-142-3p 后，經(jīng) TGF-β3 處理的 Sertoli 細(xì)胞與對(duì)照組相比 TER 值及 Na-F通透率均無(wú)明顯差異（圖 3.2），證明 miR-142-3p 過(guò)表達(dá)能夠顯著改善 TGF-β3 誘導(dǎo)的 Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退。A B
中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文子[7]，為了進(jìn)一步了解 miR-142-3p 拮抗 TGF-β3 誘導(dǎo)的 Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退的作用機(jī)制，我們采用免疫沉淀檢測(cè)了各組細(xì)胞 Cdc42 的活性水平。結(jié)果顯示：TGF-β3處理對(duì) Cdc42 具有明顯的激活作用，即其活性形式 Cdc42-GTP 的水平明顯增高；而過(guò)表達(dá) miR-142-3p 后，經(jīng) TGF-β3 處理的 Sertoli 細(xì)胞中 Cdc42-GTP 的水平與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化（圖 3.3 A、B）。同時(shí)，我們檢測(cè)了各組 Sertoli 細(xì)胞中緊密連接蛋白 occludin 的表達(dá)水平。免疫印跡及免疫熒光結(jié)果均顯示：與對(duì)照組相比，TGF-β3 處理組 occludin 表達(dá)水平顯著下降；而過(guò)表達(dá) miR-142-3p 后再經(jīng) TGF-β3處理的 Sertoli 細(xì)胞中，occludin 表達(dá)水平與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化；并且單獨(dú)過(guò)表達(dá) miR-142-3p 的 Sertoli 細(xì)胞中 occludin 表達(dá)水平與對(duì)照組相比有所升高（圖 3.3）。以上結(jié)果表明 miR-142-3p 在體外 BTB 模型中能夠抑制 TGF-β3 誘導(dǎo)的大鼠原代Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退。AC
本文編號(hào)：3300554
【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
BTB周期性變化及本研究思路示意圖
3.2 miR-142-3p 抑制 TGF-β3 誘導(dǎo)的大鼠原代 Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退基于 miR-142-3p 在多種 TGF-β3 介導(dǎo)調(diào)控的細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮重要作用[19-21]，并在大鼠生精上皮周期中具有與 TGF-β3 相反的表達(dá)趨勢(shì)，我們分析了 miR-142-3p 對(duì)TGF-β3 誘導(dǎo)的 Sertoli 細(xì)胞屏障功能損傷的影響。我們從 20 天齡 SD 大鼠睪丸中分離提取 Sertoli 細(xì)胞，通過(guò)原代培養(yǎng)構(gòu)建體外 BTB 模型，進(jìn)行 BTB 屏障功能檢測(cè)�？缟掀る娮瑁═ER）測(cè)定及熒光素鈉（Na-F）通透率檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，TGF-β3（3 ng/ml，24 h）處理組 TER 值降低約 40%（圖 3.2A），同時(shí) Na-F 通透率升高約 30%（圖 3.2 B），表明 TGF-β3 處理能夠誘導(dǎo) Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退。而過(guò)表達(dá) miR-142-3p 后，經(jīng) TGF-β3 處理的 Sertoli 細(xì)胞與對(duì)照組相比 TER 值及 Na-F通透率均無(wú)明顯差異（圖 3.2），證明 miR-142-3p 過(guò)表達(dá)能夠顯著改善 TGF-β3 誘導(dǎo)的 Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退。A B
中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文子[7]，為了進(jìn)一步了解 miR-142-3p 拮抗 TGF-β3 誘導(dǎo)的 Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退的作用機(jī)制，我們采用免疫沉淀檢測(cè)了各組細(xì)胞 Cdc42 的活性水平。結(jié)果顯示：TGF-β3處理對(duì) Cdc42 具有明顯的激活作用，即其活性形式 Cdc42-GTP 的水平明顯增高；而過(guò)表達(dá) miR-142-3p 后，經(jīng) TGF-β3 處理的 Sertoli 細(xì)胞中 Cdc42-GTP 的水平與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化（圖 3.3 A、B）。同時(shí)，我們檢測(cè)了各組 Sertoli 細(xì)胞中緊密連接蛋白 occludin 的表達(dá)水平。免疫印跡及免疫熒光結(jié)果均顯示：與對(duì)照組相比，TGF-β3 處理組 occludin 表達(dá)水平顯著下降；而過(guò)表達(dá) miR-142-3p 后再經(jīng) TGF-β3處理的 Sertoli 細(xì)胞中，occludin 表達(dá)水平與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化；并且單獨(dú)過(guò)表達(dá) miR-142-3p 的 Sertoli 細(xì)胞中 occludin 表達(dá)水平與對(duì)照組相比有所升高（圖 3.3）。以上結(jié)果表明 miR-142-3p 在體外 BTB 模型中能夠抑制 TGF-β3 誘導(dǎo)的大鼠原代Sertoli 細(xì)胞屏障功能減退。AC
本文編號(hào)：3300554
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