【目的】通過構建假交替單胞菌（Pseudoalteromonassp.DL-6）低溫幾丁質酶（chitinaseA,chi A;chitinase C, chi C）的重組乳酸克魯維酵母菌株、純化重組蛋白并對其進行酶學性質表征,為低溫幾丁質酶潛在工業(yè)化生產幾丁寡糖奠定理論基礎�！痉椒ā咳斯ず铣擅艽a子優(yōu)化的幾丁質酶基因,構建重組乳酸克魯維酵母表達質粒（p KLAC1-chi A、p KLAC1-chi C）并用電脈沖法轉化到乳酸克魯維酵母中,實現(xiàn)低溫幾丁質酶的可溶表達。利用鎳柱親和層析純化得到高純度的重組幾丁質酶�！窘Y果】成功構建產低溫幾丁質酶的重組乳酸克魯維酵母并純化獲得高純度的重組幾丁質酶。經SDS-PAGE分析在110 k Da與90 k Da附近出現(xiàn)符合預期大小的蛋白條帶。鐵氰化鉀法測得Chi A和Chi C的酶活分別為51.45 U/mg與108.56 U/mg。最適反應溫度分別為20°C和30°C,最適p H分別為8.0和9.0。在低于40°C,p H 8.0–12.0時,Chi A和Chi C重組酶較穩(wěn)定。Chi A和Chi C對膠體幾丁質以及粉狀底物α-幾丁質與β-幾丁質... 

【文章來源】：微生物學報. 2020,60(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

chiA、chiC基因電泳結果

重組表達質粒pKLAC2-chiA及pKLAC2-chiC的酶切鑒定

將K.lactis GG799/pKLAC2和重組菌株K.lactis GG799/p KLAC2-chi A、K.lactis GG799/p KLAC2-chiC在YPD培養(yǎng)基中，30°C、200 r/min培養(yǎng)48 h后離心取上清液經Ni-NTA柱純化，如圖5與圖6所示。重組菌株發(fā)酵液上清與重組菌K.lactis/pKLAC2相比，重組菌K.lactis GG799/pKLAC2-chiA、K.lactis GG799/pKLAC2-chiC經純化后在110 kDa和90 kDa附近可見單一蛋白條帶，說明在ChiA和ChiC在K.lactis GG799中得到有效的分泌表達。純化蛋白ChiA與ChiC的蛋白濃度分別為1.26 mg/mL與1.48 mg/mL，酶活力分別為51.45 U/mg與108.56 U/mg。圖4.酵母轉化子PCR鑒定

【參考文獻】：
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本文編號：3284040