三角褐指藻遺傳轉(zhuǎn)化及高產(chǎn)油轉(zhuǎn)化株的研究
發(fā)布時(shí)間:2021-07-09 02:05
三角褐指藻是一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)學(xué)意義的多形態(tài)單細(xì)胞硅藻。該藻生長(zhǎng)在海洋或鹽湖中,可以合成和累積巖藻黃質(zhì),金藻昆布糖,多不飽和脂肪酸等高價(jià)值化合物。此外,由于三角褐指藻生長(zhǎng)速度快、不占用淡水資源、能夠積累自身干重20%-30%的油脂,該藻已經(jīng)成為潛在的生物柴油資源藻種。近年來,由于核基因組、葉綠體基因組、線粒體基因組、蛋白質(zhì)組研究成果的積累和完善,三角褐指藻已經(jīng)成為研究硅藻遺傳學(xué)、生理學(xué)以及生化過程的―模型生物‖。在本文中,作者研究了三角褐指藻的無菌化培養(yǎng);對(duì)基因槍轉(zhuǎn)化以及轉(zhuǎn)化子篩選方法進(jìn)行了優(yōu)化;敲低了內(nèi)源Pt PEPC1和Pt PEPC2基因轉(zhuǎn)錄;將At LEC1和At LEC1-LIKE(At L1L)轉(zhuǎn)錄因子密碼子優(yōu)化后進(jìn)行異源表達(dá),最終獲得了油脂含量顯著提高的轉(zhuǎn)化藻株。經(jīng)系統(tǒng)的研究,形成了三角褐指藻遺傳轉(zhuǎn)化的高效實(shí)驗(yàn)研究體系。具體研究結(jié)果如下:1、建立了三角褐指藻的無菌純化方法采用不同濃度的四種抗生素處理含有伴生菌的三角褐指藻藻液。Ampicillin(Amp)組對(duì)三角褐指藻細(xì)胞的生長(zhǎng)以及相關(guān)生理生化指標(biāo)沒有顯著性影響。在除菌方面,Amp的效價(jià)較低,在濃度400mg/L...
【文章來源】:遼寧師范大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】:145 頁
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【部分圖文】:
微藻三酰甘油生物合成示意圖
四種抗生素對(duì)藻細(xì)胞Fv/Fm值的影響
遼寧師范大學(xué)博士學(xué)位論文-16-圖2.2四種抗生素對(duì)藻細(xì)胞Y(Ⅱ)值的影響Fig.2.2VariationineffectivephotochemicalefficiencyofP.tricornutumunderdifferentantibiotictreatments.PSII光合放氧復(fù)合體的效率可以用Fo/Fv來表示,如圖2.3所示,在7d的培養(yǎng)時(shí)間里,對(duì)照組Fo/Fv呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。50~200mg/LAmp組與Kan組與對(duì)照組相比沒有顯著性差異,而400mg/LAmp組與Kan組加藥處理藻細(xì)胞3天后,F(xiàn)o/Fv值低于對(duì)照組。100mg/L~400mg/LCmp處理藻細(xì)胞1d后,F(xiàn)o/Fv達(dá)到最大值(其中400mg/LCmp組Fv/Fm升高到26.5),隨后立即下降。50mg/LCmp組Fo/Fv值相對(duì)變化平緩,但始終高于對(duì)照組。與100mg/L~400mg/LCmp組相似,50mg/L~400mg/LTet組處理藻細(xì)胞1d后,F(xiàn)o/Fv同樣達(dá)到最大值后下降。
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]擬南芥Leafy Cotyledon 2的表達(dá)提高了小球藻Chlorella sorokiniana的油脂含量[J]. 劉長(zhǎng)斌,佟少明,張文蕾,侯和勝. 生物工程學(xué)報(bào). 2017(06)
[2]微藻與細(xì)菌作用關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 張晶,侯和勝,佟少明. 激光生物學(xué)報(bào). 2016(05)
[3]三角褐指藻PPDK基因RNAi載體的構(gòu)建和基因槍轉(zhuǎn)化[J]. 王娟飛,陳志森,陳軍. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(03)
[4]Kozak序列+4G提高綠色熒光蛋白在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 杜明梅,葉玲,劉建偉,劉靜,楊立娜. 生物工程學(xué)報(bào). 2008(03)
[5]獲得轉(zhuǎn)反義PEP基因超高油大豆新材料[J]. 趙桂蘭,陳錦清,尹愛萍,胡張華,錢雪燕,郭東全. 分子植物育種. 2005(06)
[6]反義PEP基因調(diào)控油菜籽粒蛋白質(zhì)/油脂含量比率的研究[J]. 陳錦清,郎春秀,胡張華,劉智宏,黃銳之. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 1999(04)
本文編號(hào):3272790
【文章來源】:遼寧師范大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】:145 頁
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【部分圖文】:
微藻三酰甘油生物合成示意圖
四種抗生素對(duì)藻細(xì)胞Fv/Fm值的影響
遼寧師范大學(xué)博士學(xué)位論文-16-圖2.2四種抗生素對(duì)藻細(xì)胞Y(Ⅱ)值的影響Fig.2.2VariationineffectivephotochemicalefficiencyofP.tricornutumunderdifferentantibiotictreatments.PSII光合放氧復(fù)合體的效率可以用Fo/Fv來表示,如圖2.3所示,在7d的培養(yǎng)時(shí)間里,對(duì)照組Fo/Fv呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。50~200mg/LAmp組與Kan組與對(duì)照組相比沒有顯著性差異,而400mg/LAmp組與Kan組加藥處理藻細(xì)胞3天后,F(xiàn)o/Fv值低于對(duì)照組。100mg/L~400mg/LCmp處理藻細(xì)胞1d后,F(xiàn)o/Fv達(dá)到最大值(其中400mg/LCmp組Fv/Fm升高到26.5),隨后立即下降。50mg/LCmp組Fo/Fv值相對(duì)變化平緩,但始終高于對(duì)照組。與100mg/L~400mg/LCmp組相似,50mg/L~400mg/LTet組處理藻細(xì)胞1d后,F(xiàn)o/Fv同樣達(dá)到最大值后下降。
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]擬南芥Leafy Cotyledon 2的表達(dá)提高了小球藻Chlorella sorokiniana的油脂含量[J]. 劉長(zhǎng)斌,佟少明,張文蕾,侯和勝. 生物工程學(xué)報(bào). 2017(06)
[2]微藻與細(xì)菌作用關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 張晶,侯和勝,佟少明. 激光生物學(xué)報(bào). 2016(05)
[3]三角褐指藻PPDK基因RNAi載體的構(gòu)建和基因槍轉(zhuǎn)化[J]. 王娟飛,陳志森,陳軍. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(03)
[4]Kozak序列+4G提高綠色熒光蛋白在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 杜明梅,葉玲,劉建偉,劉靜,楊立娜. 生物工程學(xué)報(bào). 2008(03)
[5]獲得轉(zhuǎn)反義PEP基因超高油大豆新材料[J]. 趙桂蘭,陳錦清,尹愛萍,胡張華,錢雪燕,郭東全. 分子植物育種. 2005(06)
[6]反義PEP基因調(diào)控油菜籽粒蛋白質(zhì)/油脂含量比率的研究[J]. 陳錦清,郎春秀,胡張華,劉智宏,黃銳之. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 1999(04)
本文編號(hào):3272790
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