對來自Salk庫的擬南芥T-DNA插入突變體SALK₀37453的表型分析發(fā)現(xiàn),該突變體株系因蓮座葉葉柄較短而呈現(xiàn)聚集表型。遺傳分析和PCR檢測顯示,SALK₀37453突變體的表型與網(wǎng)站提供的T-DNA插入位點所在基因不連鎖,應(yīng)是由另外的未知插入位點的T-DNA引起的。為了尋找該位點,鑒定導(dǎo)致蓮座葉聚集表型的基因,本研究利用TAIL-PCR的方法,鑒定出與突變表型連鎖的T-DNA插入位點,位于基因At4G39400（AtBRI1）和At4G39403（AtPLS）之間。進一步利用qRT-PCR的方法檢測,發(fā)現(xiàn)該位點由于T-DNA的插入,同時影響了AtBRI1和AtPLS的轉(zhuǎn)錄水平的表達。該研究為探索葉發(fā)育的過程提供了新的候選基因,并為進一步闡明AtBRI1和AtPLS的生物學(xué)功能提供了新材料。 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,43(03)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

SALK＿037453(atplc3-1）和SALK＿054406(atplc3-2）的T-DNA插入位點（A）及AtPLC3基因的表達（B)

圖1 SALK＿037453(atplc3-1）和SALK＿054406(atplc3-2）的T-DNA插入位點（A）及AtPLC3基因的表達（B)2.2 利用TAIL-PCR捕獲SALK＿037453X中未知T-DNA插入位點X

本試驗中以SALK＿037453X擬南芥基因組DNA為模板，利用TAIL-PCR技術(shù)以3個T-DNA序列中的特異引物和4個隨機兼并引物擴增T-DNA側(cè)翼序列，發(fā)現(xiàn)特異引物分別與AD1,AD2,AD3組合條件下可以獲得清晰的條帶，且比第2輪小300 bp（圖3A），符合TAIL-PCR的要求。切下符合要求的3個（圖3A中箭頭所指）條帶并送測序，比對后發(fā)現(xiàn)3條帶的序列是相同的，進一步在擬南芥基因組中BLAST，獲得了T-DNA插入的X位點兩側(cè)區(qū)域的堿基序列（圖3B），該序列位于基因At4G39400(AtBRI1）和At4G39403(AtPLS）之間，屬于基因的調(diào)控區(qū)（圖3C）。獲得X位點的序列后，進一步通過遺傳雜交結(jié)合PCR檢測的方法獲取僅有X位點T-DNA插入的SALK＿037453X的純合體，即SALK＿037453X中的T-DNA只有1個拷貝，且插入在X位點,并觀察表型。結(jié)果顯示SALK＿037453X純合體也呈現(xiàn)蓮座葉聚集表型（圖2A），證實該突變表型僅由T-DNA在X位點的插入造成的。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]利用TAIL-PCR技術(shù)分析擬南芥At1g52910突變體插入位點的側(cè)翼序列[J]. 田蕾,郭妍君,任麗,王鈺,孫菲,齊海坤,馬楠,戚曉利.  中國野生植物資源. 2016(04)



本文編號：3269716