蛋白質(zhì)的乙�；揎検且活惛叨缺Ｊ氐目赡娴牡鞍踪|(zhì)翻譯后修飾,它廣泛發(fā)生于生物體的各種生理活動(dòng)中。越來越多的研究表明,蛋白質(zhì)的乙酰化能夠調(diào)控或參與多種生命活動(dòng),且在蛋白質(zhì)功能發(fā)生與穩(wěn)定性上發(fā)揮重要作用。在對(duì)家蠶血淋巴內(nèi)的各種營養(yǎng)儲(chǔ)藏類蛋白進(jìn)行了高通量乙酰化鑒定后,發(fā)現(xiàn)人類Apolipoprotein蛋白的同源蛋白,家蠶血淋巴內(nèi)的BmApoLp-Ⅱ蛋白（Bombyx mori Apolipophorin-Ⅱ）具有很高的乙�；潭取１菊n題針對(duì)乙�；揎棇�(duì)BmApoLp-Ⅱ蛋白的穩(wěn)定性影響及其機(jī)制進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究,以期能夠進(jìn)一步闡釋乙�；揎椏赡軈⑴c的調(diào)控家蠶營養(yǎng)儲(chǔ)藏和利用的新機(jī)制。首先對(duì)BmApoLp-Ⅱ在真核細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和乙�；潭冗M(jìn)行鑒定。利用Trizol法從家蠶卵巢上皮細(xì)胞（BmN）中獲取家蠶的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,PCR擴(kuò)增BmApoLp-Ⅱ基因ORF編碼區(qū),通過酶切將其連接到真核表達(dá)載體pIEX-1-si-GFP上,這種經(jīng)改造的載體能夠同時(shí)共表達(dá)GFP蛋白和目的蛋白,共表達(dá)的GFP蛋白可用來確定轉(zhuǎn)染效率和作為參照蛋白。將構(gòu)建的重組載體pIEX-1-si-GFP-BmApoL... 

【文章來源】：浙江理工大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．２?基因ＰＣＲ雙酶切??￣

３．２真核表達(dá)載體ｐＩＥＸ－ｌ－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ的驗(yàn)證??活化帶有ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ質(zhì)粒的ＴＧＩ，以其菌液作為ＰＣＲ的模??板，進(jìn)行驗(yàn)證，然后將ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行核酸電泳，如圖３．４（ａ）所示，在預(yù)測(cè)位置有??一條與目的帶大小一致的條帶；從ＴＧ１中提�。穑桑牛兀保螅椋牵疲校拢恚粒穑铮蹋穑桑少|(zhì)粒，??用Ｉ和刀ｗ?Ｉ對(duì)其進(jìn)行雙酶切，將雙酶切產(chǎn)物進(jìn)行核酸電泳，結(jié)果顯示，??在基因預(yù)測(cè)大小位置有一條大小相同的酶切條帶，如圖３．４（ｂ），表??明ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ構(gòu)建成功，將其送往生物公司進(jìn)行測(cè)序鑒定，序??列和預(yù)期一致（結(jié)果略）。??ｂｐ?Ｍ?１?ｂｐ?Ｍ?１??５麵?５Ｇ（）Ｇ??３０００??ＢｍＡＰ〇ＬＰ－ｎ?２０００??１５００?１５００??（ａ）?（ｂ）??圖３．４ｐＩＥＸ－ｌ－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ質(zhì)粒的ＰＣＲ鑒定（ａ）和雙酶切鑒定（ｂ）??Ｆｉｇ．３．４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ?ｂｙ?ＰＣＲ?（ａ）?ａｎｄ?ｄｏｕｂｌｅ?ｅｎｚ＞?ｍｅｓ??ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?（ｂ）??１９??

ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ預(yù)測(cè)大小位置存在目的條帶，表明我們成功??通過ＩＰ方法分離得到ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ；同樣以乙�；贵wＷｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測(cè)，在??相同位置存在特異性條帶，如圖３．７所示，表明表達(dá)的ＨＩＳ融合ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ蛋??白具有較高的乙�；揎�，和前期質(zhì)譜乙�；b定結(jié)果一致｜５７］。??２１??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p53調(diào)節(jié)蛋白的研究進(jìn)展[J]. 張紅,徐風(fēng)蘭,李鴻巖,胡曉婭,羅冰芝,張哲,劉小琴,孔亞茸.  重慶醫(yī)學(xué). 2018(21)
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碩士論文
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[2]乙�；閷�(dǎo)的家蠶Bm30K-3蛋白穩(wěn)定性機(jī)制及抗凋亡功能分析[D]. 吳程程.浙江理工大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3267908