目的探討肌球蛋白1D （myosin 1d,MYO1D）對自噬溶酶體形成的影響及其作用機制。方法免疫熒光觀察大鼠腎上皮（normal rat kidney,NRK）細(xì)胞內(nèi)MYO1D蛋白質(zhì)與自噬體標(biāo)志性蛋白質(zhì)微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule associated protein 1 light Chain 3, LC3）的共定位關(guān)系;CRISPR-Cas9技術(shù)敲除NRK細(xì)胞中MYO1D基因,并分為MYO1D基因未敲除組,即NC組（non-specific control, NC）與MYO1D基因敲除組,即KO組（myosin1d knockout, KO）;免疫熒光觀察兩組細(xì)胞中LC3與溶酶體關(guān)聯(lián)膜蛋白1 （lysosomal associated membrane protein 1, LAMP1）的共定位關(guān)系;蛋白質(zhì)免疫印跡檢測兩組細(xì)胞自噬底物蛋白P62（p62/sequestosom-1,p62）的表達水平;對兩組細(xì)胞進行熒光融合蛋白GFP-RFP-LC3（GFP-RFP-LC3）轉(zhuǎn)染,在激光共聚焦顯微鏡下示蹤自噬溶酶體的形成,并利用溶酶體標(biāo)記探針（lyso-track... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,43(09)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

MYO1D與LC3的共定位關(guān)系(×600)

與NC組比較,KO組LC3與LAMP1共定位程度顯著減少,熒光擬合程度降低,見圖3、4。與NC組比較,KO組P62蛋白質(zhì)的表達水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),見表1。圖3 兩組細(xì)胞LC3與LAMP1的共定位關(guān)系(×600)

圖3 兩組細(xì)胞LC3與LAMP1的共定位關(guān)系(×600)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]神經(jīng)妥樂平對阿爾茨海默病大鼠自噬的影響[J]. 趙仲艷,劉濤,趙二義,黃仕雄,徐志育.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020(03)
[2]轉(zhuǎn)錄因子EB與自噬及帕金森病相關(guān)性研究進展[J]. 金君,吳憂.  中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志. 2019(01)
[3]p62蛋白功能及相關(guān)信號通路研究[J]. 趙萍萍,要樂,蔚丹丹,郝慧芳.  生命科學(xué). 2018(01)
[4]依達拉奉對蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞p-ERK1/2蛋白及自噬的影響[J]. 付程凱,李建民,趙宏濤,劉俊杰,趙雅寧,李雪梅,梁文吉.  新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2018(01)



本文編號：3264959