發(fā)布時(shí)間：2021-06-27 20:34

　　α-L-鼠李糖苷酶催化末端含α-L-鼠李糖的天然產(chǎn)物,該酶廣泛分布于自然界,細(xì)菌、真菌、酵母、動(dòng)植物體內(nèi)均有報(bào)道,工業(yè)應(yīng)用范圍廣,是生物技術(shù)應(yīng)用重要的一類酶。本研究首先基于目標(biāo)底物蘆丁與其苷元槲皮素的紫外-可見光譜差異,利用雙波長檢測建立全新的高通量篩選方法,隨后利用半理性設(shè)計(jì)策略,集中于廣義酸基序進(jìn)行定點(diǎn)飽和突變和定點(diǎn)突變,旨在最終獲得水解蘆丁的高活性α-L-鼠李糖苷酶突變體,并研究其突變體酶學(xué)性質(zhì),同時(shí)也探索了利用微波輔助乙醇萃取法探索從苦蕎葉和苦蕎茶中獲得高純度、高濃度天然蘆丁提取液。本實(shí)驗(yàn)室前期通過檢索CAZy數(shù)據(jù)庫,以多形擬桿菌VPI-5482全基因組為模板成功擴(kuò)增獲得目的基因BtRha78A,連接至載體pET-28a,對(duì)酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行表征,與同源GH78家族α-L-鼠李糖苷酶三級(jí)結(jié)構(gòu)和序列進(jìn)行比對(duì),經(jīng)丙氨酸掃描突變驗(yàn)證,確定BtRha78A催化關(guān)鍵殘基,對(duì)其廣義酸基序研究顯示,基序中一部分殘基為非催化功能殘基。在酸性,甲醇和堿性中測定黃酮化合物蘆丁、異槲皮素與槲皮素0 min及孵育30min后250-500 nm吸收值,蘆丁在400 nm具有特征峰,槲皮素在320 nm有特征... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

三種酶分子改造策略序列改變大小與所需信息

第一章文獻(xiàn)綜述3表1.1三種常見酶分子改造策略Table1.1Threestrategiesforenzymemolecularredesign方法所需信息突變庫構(gòu)建突變庫容量高通量篩選方法定向進(jìn)化序列信息易錯(cuò)PCR較大需要，且要求較高理性設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)信息與催化機(jī)理點(diǎn)對(duì)點(diǎn)突變較小不需要半理性設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)信息定點(diǎn)飽和突變一般需要圖1.2酶分子改造策略理性設(shè)計(jì)與定向設(shè)計(jì)歷程比較[15]Fig.1.2Thecomparisonofthetwostrategiesrationaldesignanddirectedevolutionforenzymeredesign.

第一章文獻(xiàn)綜述5圖1.3黃酮的基本分子結(jié)構(gòu)與類型Fig.1.3Themolecularstructuresandsubgroupsoftheflavonoids.圖1.4橙皮苷與柚皮苷的分子結(jié)構(gòu)Fig.1.4Molecularstructuresofhesperidinandnaringin.1.2.2蘆丁及其相關(guān)黃酮化合物槲皮素是一種常見的黃酮醇（圖1.5），其作為苷元在3-OH位引入β-D-葡萄糖苷即為異槲皮素（圖1.5），在此β-D-葡萄糖基的6-OH再引入α-L-鼠李糖基即成為蘆�。▓D1.5），蘆丁是槲皮素的蕓香糖（α-L-鼠李糖1-6-β-D-葡萄糖）苷，蘆丁可被α-L-鼠李糖苷酶水解產(chǎn)生異槲皮素，異槲皮素在β-D-葡萄糖苷酶作用下可生物轉(zhuǎn)化為槲皮素（圖1.5）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]黃酮類化合物吸收代謝及其對(duì)胃腸道功能影響的研究進(jìn)展[J]. 常化松,袁雯雯,玄紅專,王凱.  食品工業(yè)科技. 2019(18)
[4]四種蘆丁提取方法的比較研究[J]. 涂清波,孫振翰,徐曉芳,朱安宏,吳娜,何立巍.  海峽藥學(xué). 2019(01)
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[10]化學(xué)法結(jié)合酶法提取牛蒡中的可溶性膳食纖維[J]. 任媛媛,郝建雄,李穩(wěn),劉殿武.  中國食品添加劑. 2017(01)

博士論文
[1]利用半理性和理性策略對(duì)酶活性及手性選擇性的設(shè)計(jì)[D]. 郭斐.浙江大學(xué) 2015

碩士論文
[1]新型細(xì)菌源α-L-鼠李糖苷酶挖掘及其生物轉(zhuǎn)化應(yīng)用[D]. 張?zhí)?山西大學(xué) 2019
[2]多形擬桿菌α-L-鼠李糖苷酶資源挖掘及其結(jié)構(gòu)分析[D]. 吉亞茹.山西大學(xué) 2018
[3]蛋白質(zhì)半理性設(shè)計(jì)提高Candida Rugosa Lipase 1的熱穩(wěn)定性[D]. 韓蘊(yùn)琪.吉林大學(xué) 2011
[4]苦蕎麥葉黃酮提純及其功能活性研究[D]. 賈雪峰.西南大學(xué) 2007
[5]槐花中總黃酮的提取及單體分離提純研究[D]. 蘭昌云.成都理工大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3253563