PDS基因編碼控制類(lèi)胡蘿卜素生物合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶,其被沉默或抑制性表達(dá)會(huì)使葉片組織出現(xiàn)斑駁、黃化、白化的現(xiàn)象.構(gòu)建綠萍（Lemna minor）LmPDS基因RNAi載體及完成遺傳轉(zhuǎn)化研究,對(duì)于實(shí)現(xiàn)RNAi技術(shù)在綠萍中的應(yīng)用具有重要意義.選取595 bp LmPDS基因片段為干涉片段,利用中間載體pUCCRNAi將克隆的LmPDS干涉片段正反向插入植物表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-OCST中.將成功構(gòu)建的RNAi載體通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入綠萍愈傷,經(jīng)愈傷抗性篩選、植株再生、植株擴(kuò)培、標(biāo)記基因NPTII檢測(cè)等過(guò)程,獲得植株70株,其中4株為轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株.再經(jīng)熒光定量PCR分析、番茄紅素含量檢測(cè)、表型觀察轉(zhuǎn)基因植株.結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株LmPDS相對(duì)表達(dá)量明顯下降,為對(duì)照的28.8%-40.5%,其番茄紅素含量也明顯下降,且葉片出現(xiàn)了明顯的白化表型.本研究成功構(gòu)建綠萍LmPDS基因RNAi載體,實(shí)現(xiàn)了RNAi在綠萍中的應(yīng)用,結(jié)果可為進(jìn)一步的綠萍基因功能研究提供材料和方法.（圖11表1參30） 

【文章來(lái)源】：應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào). 2020,26(02)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

LmPDS-RNAi載體構(gòu)建圖.

分別以c DNA和p UC1質(zhì)粒為模板，擴(kuò)增出Lm PDS-Sence、LmPDS-Antisence片段.瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，擴(kuò)增的條帶清晰且條帶單一（圖4），能夠用于后續(xù)試驗(yàn).2.4 重組載體pUC1、pUC2、LmPDS-RNAi的菌液PCR檢測(cè)及酶切鑒定

以18S rRNA基因?yàn)閮?nèi)參基因，q-18S-F和q-18S-R、q-LmPDS-F和q-LmPDS-R為熒光定量PCR引物，檢測(cè)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株LmPDS基因相對(duì)表達(dá)量.試驗(yàn)結(jié)果表明，4個(gè)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株LmPDS基因表達(dá)量都明顯下降（圖8），與對(duì)照的相比，1號(hào)植株降低為40.5%,2號(hào)植株降低為33.2%,3號(hào)植株降低為34.7%,4號(hào)植株降低為28.8%.表明轉(zhuǎn)入的干擾片段對(duì)轉(zhuǎn)錄的mRNA發(fā)生了沉默作用.圖4 LmPDS-Sence、LmPDS-Antisence干涉片段的擴(kuò)增.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于RNAi的轉(zhuǎn)基因作物研發(fā)進(jìn)展[J]. 張守路,饒力群,汪啟明.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2018(21)
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[3]芥藍(lán)八氫番茄紅素脫氫酶基因BaPDS1和BaPDS2的克隆與表達(dá)分析[J]. 孫勃,張芬,夏雪,薛生玲,袁巧,陳清,湯浩茹.  園藝學(xué)報(bào). 2016(11)
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[5]溶劑萃取法提取番茄紅素的研究[J]. 路世武,李師翁,董玉.  蘭州交通大學(xué)學(xué)報(bào). 2006(06)

碩士論文
[1]蠟梅八氫番茄紅素脫氫酶基因CpPds的克隆與表達(dá)分析[D]. 陶靜靜.西南大學(xué) 2013
[2]水稻OsELF3基因RNAi載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化研究[D]. 趙俊茗.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3249683