PDS基因編碼控制類胡蘿卜素生物合成過程中的關鍵酶,其被沉默或抑制性表達會使葉片組織出現(xiàn)斑駁、黃化、白化的現(xiàn)象.構(gòu)建綠萍（Lemna minor）LmPDS基因RNAi載體及完成遺傳轉(zhuǎn)化研究,對于實現(xiàn)RNAi技術在綠萍中的應用具有重要意義.選取595 bp LmPDS基因片段為干涉片段,利用中間載體pUCCRNAi將克隆的LmPDS干涉片段正反向插入植物表達載體pCAMBIA2300-35S-OCST中.將成功構(gòu)建的RNAi載體通過農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)入綠萍愈傷,經(jīng)愈傷抗性篩選、植株再生、植株擴培、標記基因NPTII檢測等過程,獲得植株70株,其中4株為轉(zhuǎn)基因陽性植株.再經(jīng)熒光定量PCR分析、番茄紅素含量檢測、表型觀察轉(zhuǎn)基因植株.結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因陽性植株LmPDS相對表達量明顯下降,為對照的28.8%-40.5%,其番茄紅素含量也明顯下降,且葉片出現(xiàn)了明顯的白化表型.本研究成功構(gòu)建綠萍LmPDS基因RNAi載體,實現(xiàn)了RNAi在綠萍中的應用,結(jié)果可為進一步的綠萍基因功能研究提供材料和方法.（圖11表1參30） 

【文章來源】：應用與環(huán)境生物學報. 2020,26(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

LmPDS-RNAi載體構(gòu)建圖.

分別以c DNA和p UC1質(zhì)粒為模板，擴增出Lm PDS-Sence、LmPDS-Antisence片段.瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，擴增的條帶清晰且條帶單一（圖4），能夠用于后續(xù)試驗.2.4 重組載體pUC1、pUC2、LmPDS-RNAi的菌液PCR檢測及酶切鑒定

以18S rRNA基因為內(nèi)參基因，q-18S-F和q-18S-R、q-LmPDS-F和q-LmPDS-R為熒光定量PCR引物，檢測轉(zhuǎn)基因陽性植株LmPDS基因相對表達量.試驗結(jié)果表明，4個轉(zhuǎn)基因陽性植株LmPDS基因表達量都明顯下降（圖8），與對照的相比，1號植株降低為40.5%,2號植株降低為33.2%,3號植株降低為34.7%,4號植株降低為28.8%.表明轉(zhuǎn)入的干擾片段對轉(zhuǎn)錄的mRNA發(fā)生了沉默作用.圖4 LmPDS-Sence、LmPDS-Antisence干涉片段的擴增.

【參考文獻】：
期刊論文
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[4]浮萍（Lemna aequinoctialis）干粉對Pb2+的吸附[J]. 陳蘭釵,方揚,靳艷玲,陳謙,趙永貴,肖瑤,趙海.  應用與環(huán)境生物學報. 2013(06)
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碩士論文
[1]蠟梅八氫番茄紅素脫氫酶基因CpPds的克隆與表達分析[D]. 陶靜靜.西南大學 2013
[2]水稻OsELF3基因RNAi載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化研究[D]. 趙俊茗.四川農(nóng)業(yè)大學 2011



本文編號：3249683