利用荔枝果皮花青苷生物合成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因LcMYB1為標(biāo)記,構(gòu)建植物表達(dá)載體pBA002-LcMYB1,電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)入發(fā)根農(nóng)桿菌A4菌株,通過(guò)葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化煙草K326。結(jié)果表明,煙草葉片侵染一周后長(zhǎng)出白色的毛狀根,約3周后部分毛狀根逐漸變成紅色,毛狀根誘導(dǎo)率為100%,紅色毛狀根誘導(dǎo)率為19.9%。當(dāng)篩選培養(yǎng)基中添加5 mg·L^-1 Basta,毛狀根誘導(dǎo)率降低為33.3%,但紅色毛狀根誘導(dǎo)率提高到75%。高效液相色譜分析表明,紅色毛狀根中積累矢車(chē)菊素–3–葡萄糖苷和矢車(chē)菊素–3–蕓香糖苷,PCR檢測(cè)證實(shí)紅色毛狀根是由LcMYB1的轉(zhuǎn)入引起的。實(shí)時(shí)熒光定量PCR表明轉(zhuǎn)LcMYB1可以誘導(dǎo)煙草毛狀根中花青苷生物合成相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)節(jié)基因表達(dá)。 

【文章來(lái)源】：園藝學(xué)報(bào). 2020,47(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

pBA002-LcMYB1植物表達(dá)載體示意圖

培養(yǎng)大約3周后，含空載體pBA002的發(fā)根農(nóng)桿菌侵染誘導(dǎo)出來(lái)的毛狀根始終呈現(xiàn)白色（圖2,A），含pBA002-LcMYB1質(zhì)粒的發(fā)根農(nóng)桿菌侵染誘導(dǎo)的毛狀根一部分從基部開(kāi)始逐漸變成紅色（圖2,B）。在不含Basta的培養(yǎng)基上，獲得的毛狀根數(shù)量最多，但紅色毛狀根僅占19.9%;5 mg·L-1 Basta使毛狀根的數(shù)量降低，但紅色毛狀根的占比提高到75.0%，表明5 mg·L-1 Basta可以作為篩選紅色毛狀根的適宜選擇壓力（表2）。將紅色毛狀根從外植體上切下來(lái)，放置在含5 mg·L-1 Basta的MS基本培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生大量紅色的毛狀根（圖2,C）。2.2 轉(zhuǎn)LcMYB1基因煙草紅色毛狀根的PCR檢測(cè)

對(duì)紅色毛狀根進(jìn)行LcMYB1全長(zhǎng)（846 bp）的PCR擴(kuò)增檢測(cè)，結(jié)果（圖3）表明，所有紅色毛狀根都能擴(kuò)增到與pBA002-LcMYB1陽(yáng)性對(duì)照相同的條帶，轉(zhuǎn)空載的煙草長(zhǎng)出的白色毛狀根無(wú)條帶，證實(shí)毛狀根的紅色是由LcMYB1的轉(zhuǎn)入引起的。2.3 轉(zhuǎn)LcMYB1基因煙草紅色毛狀根中花青苷的檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3240504