目的原核表達、純化一種銅鋅超氧化物歧化酶（Cu,Zn-SOD）突變體,并檢測其酶活性。方法將經熱力學優(yōu)化的Cu,Zn-SOD突變體基因亞克隆至pET-28a載體中,構建重組表達質粒SOD1-pET-28a,轉化入大腸埃希菌BL21（DE3）中,IPTG誘導表達;在500 mL搖瓶培養(yǎng)條件下,通過改變加入Cu、Zn離子的量優(yōu)化誘導表達條件;表達的重組蛋白經初步純化后,測定酶活性。結果重組表達質粒SOD-pET-28a經雙酶切及測序證明構建正確;表達的重組蛋白相對分子質量約為15 000,主要以可溶性形式表達;工程菌株在500 mL搖瓶培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至10 h左右,A₆₀₀至3. 5左右時加入終濃度為0. 1 mmol/L IPTG、0. 2 mmol/L ZnCl₂、0. 5 mmol/L CuSO4,可獲得最佳表達量（29. 2%）;初步純化獲得的重組蛋白純度為97. 32%,比活為5. 08×103U/mg。結論成功利用大腸埃希菌表達系統(tǒng)表達了一種經熱力學優(yōu)化的Cu,Zn-SOD突變體,初步純化的突變體具有較好的酶活性,為進一步摸索大規(guī)模生... 

【文章來源】：中國生物制品學雜志. 2020,33(06)CSCD

【文章頁數】：5 頁

【部分圖文】：

Cu,Zn-SOD突變體基因擴增產物電泳圖

重組表達質粒SOD1-pET-28a的雙酶切（NdeⅠ/HindⅢ）產物經瓊脂糖凝膠電泳分析，可見約500 bp的目的基因片段，見圖2。經測序及BLAST分析，片段大小與目的片段核苷酸序列一致，表明重組表達質粒構建正確。2.3 表達產物的鑒定

表達產物的SDS-PAGE分析

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3238097