目的探究通過階段性調(diào)控經(jīng)典Wnt信號通路促使人誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化。方法采用階段性激活或抑制Wnt信號通路的方案使人尿路上皮細(xì)胞來源的多潛能干細(xì)胞（U1細(xì)胞系）定向分化為心肌細(xì)胞,在分化第14天,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測U1細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的效率,利用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測心肌細(xì)胞肌鈣蛋白表達(dá),通過激光掃描共聚焦熒光顯微鏡檢測人誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞來源的心肌細(xì)胞（hiPSC-CMs）的Ca²⁺活動,利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄hiPSC-CMs的電生理特性。結(jié)果 U1細(xì)胞系向hiPSC-CMs分化的效率為（88±3）%;全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄的動作電位特征顯示hiPSC-CMs可分為心室肌樣細(xì)胞、心房肌樣細(xì)胞和竇房結(jié)樣細(xì)胞,其中主要是心室肌樣細(xì)胞。竇房結(jié)樣細(xì)胞的比例、動作電位時程、動作電位幅度及最大去極化速率均明顯小于心室肌樣細(xì)胞和心房肌樣細(xì)胞。結(jié)論階段性調(diào)控Wnt信號通路能促使hiPSCs定向分化為hiPSC-CMs,并且hiPSC-CMs具有哺乳動物心肌細(xì)胞相似的電生理特征。 

【文章來源】：心血管病學(xué)進(jìn)展. 2020,41(07)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

顯微鏡下觀察hi PSC-CMs以及流式檢測分化效率

免疫熒光:hi PSC-CMs表達(dá)c Tn T

Ca2+作為一種普遍的第二信使參與了各種細(xì)胞的病理生理過程，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度節(jié)律性改變是心臟收縮功能的基礎(chǔ)。心肌細(xì)胞的興奮收縮偶聯(lián)過程均伴隨著細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的改變，這種濃度變化的時間及空間效應(yīng)形成了心肌細(xì)胞內(nèi)的鈣瞬變。本實(shí)驗(yàn)用Ca2+指示劑Fluo4-AM轉(zhuǎn)染hi PSC-CMs，并用激光掃描共聚焦熒光顯微鏡觀察，用Leica Application Suite X軟件進(jìn)行圖像采集。結(jié)果顯示，hi PSC-CMs展現(xiàn)出自發(fā)的節(jié)律性Ca2+活動(圖4)。2.3 hi PSC-CMs的動作電位特征

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]干細(xì)胞治療心力衰竭臨床研究進(jìn)展[J]. 梁小婷,范慧敏,劉中民.  心血管病學(xué)進(jìn)展. 2018(03)



本文編號：3231306