糖苷水解酶是水解碳水化合物中糖苷鍵的一類酶,在自然界中廣泛存在,并且在食品、醫(yī)療、再生能源工業(yè)等方面具有重要應(yīng)用。本實驗室前期篩選了一株纖維單胞菌Cellulosimicrobium sp.TH-20,研究發(fā)現(xiàn)該菌株對纖維素、木聚糖及人參皂苷等多種聚合物具有降解及轉(zhuǎn)化活性,實驗室已經(jīng)對該菌株進(jìn)行了基因組測序,本論文基于基因組注釋信息圍繞Cellulosimicrobium sp.TH-20的六個糖苷水解酶進(jìn)行了相關(guān)研究。主要的實驗結(jié)果如下:1.從Cellulosimicrobium sp.TH-20中選擇了六個糖苷水解酶基因進(jìn)行克隆并構(gòu)建重組質(zhì)粒,將其在大腸桿菌中異源表達(dá),利用親和層析對重組酶進(jìn)行了純化,將獲得的六個純酶組分分別命名為CAgl13、CXyl3、CAbf51、CMal65、CAmy13和CGH43。2.CAgl13的序列分析顯示該酶為GH13家族的α-淀粉酶,酶學(xué)性質(zhì)檢測結(jié)果顯示其最適反應(yīng)溫度為40℃,在30℃以下具有較好的熱穩(wěn)定性;最適反應(yīng)pH為磷酸鹽緩沖液pH8.0,在pH5.0-12.0之間pH穩(wěn)定性較好;底物特異性廣泛,可以水解pNPβGlu、pNPαGlu、pN... 

【文章來源】：東北師范大學(xué)吉林省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞表
第1章 緒論
    1.1 糖苷水解酶概述
        1.1.1 糖苷水解酶的分類
        1.1.2 糖苷水解酶的催化機制
    1.2 α-葡糖苷酶研究進(jìn)展
        1.2.1 α-葡糖苷酶基本的家族分類
        1.2.2 α-葡糖苷酶的來源
        1.2.3 α-葡糖苷酶的結(jié)構(gòu)
        1.2.4 α-葡糖苷酶的理化性質(zhì)
        1.2.5 α-葡糖苷酶的應(yīng)用
    1.3 β-木糖苷酶研究進(jìn)展
        1.3.1 β-木糖苷酶基本的家族分類
        1.3.2 β-木糖苷酶的來源
        1.3.3 β-木糖苷酶的結(jié)構(gòu)
        1.3.4 β-木糖苷酶的性質(zhì)
        1.3.5 β-木糖苷酶的應(yīng)用
    1.4 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶研究進(jìn)展
        1.4.1 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基本的家族分類
        1.4.2 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的來源
        1.4.3 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的結(jié)構(gòu)
        1.4.4 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的性質(zhì)
        1.4.5 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的應(yīng)用
    1.5 立題依據(jù)及研究內(nèi)容
第2章 CAgl13的表達(dá)及性質(zhì)研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗質(zhì)粒
        2.1.2 實驗材料與試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基與緩沖液
        2.1.4 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 序列分析
        2.2.2 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.2.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.4 重組蛋白的分離純化
        2.2.5 重組蛋白的SDS-PAGE電泳檢測
        2.2.6 重組蛋白的濃度測定
        2.2.7 重組蛋白的酶活測定
        2.2.8 重組蛋白酶學(xué)性質(zhì)測定
    2.3 實驗結(jié)果與討論
        2.3.1 CAgl13的序列分析
        2.3.2 CAgl13的表達(dá)與純化
        2.3.3 CAgl13的酶學(xué)性質(zhì)測定
    2.4 小結(jié)
第3章 CXyl3的表達(dá)及性質(zhì)研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗質(zhì)粒
        3.1.2 實驗材料與試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基與緩沖液
        3.1.4 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 序列分析
        3.2.2 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        3.2.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.4 重組蛋白的分離純化
        3.2.5 重組蛋白的SDS-PAGE電泳檢測
        3.2.6 重組蛋白的濃度測定
        3.2.7 重組蛋白的酶活測定
        3.2.8 重組蛋白酶學(xué)性質(zhì)測定
    3.3 實驗結(jié)果與討論
        3.3.1 CXyl3的序列分析
        3.3.2 CXyl3的表達(dá)與純化
        3.3.3 CXyl3的酶學(xué)性質(zhì)測定
    3.4 小結(jié)
第4章 CAbf51的表達(dá)及性質(zhì)研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗質(zhì)粒
        4.1.2 實驗材料與試劑
        4.1.3 培養(yǎng)基與緩沖液
        4.1.4 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 序列分析
        4.2.2 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        4.2.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.2.4 重組蛋白的分離純化
        4.2.5 重組蛋白的SDS-PAGE電泳檢測
        4.2.6 重組蛋白的濃度檢測
        4.2.7 重組蛋白的酶活測定
        4.2.8 重組蛋白酶學(xué)性質(zhì)測定
    4.3 實驗結(jié)果與討論
        4.3.1 CAbf51的序列分析
        4.3.2 CAbf51的表達(dá)與純化
        4.3.3 CAbf51的酶學(xué)性質(zhì)測定
    4.4 小結(jié)
第5章 其他幾種糖苷水解酶的克隆與表達(dá)
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗菌株與質(zhì)粒
        5.1.2 實驗材料與試劑
        5.1.3 培養(yǎng)基和緩沖液
        5.1.4 實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 序列分析
        5.2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建和篩選
        5.2.3 重組蛋白的原核表達(dá)
        5.2.4 重組蛋白的純化
        5.2.5 重組蛋白的SDS-PAGE電泳檢測
        5.2.6 重組蛋白的濃度測定
        5.2.7 重組蛋白的酶活性測定
        5.2.8 底物特異性的測定
    5.3 實驗結(jié)果與討論
        5.3.1 CMal65的基因克隆及表達(dá)
        5.3.2 CAmy13的基因克隆及表達(dá)
        5.3.3 CGH43的基因克隆及表達(dá)
    5.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]生物酶在紙漿漂白過程中的應(yīng)用[J]. 李峰,王松林,宋曉明.  云南化工. 2018(08)
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[3]人參皂苷Rd抑制肝星狀細(xì)胞活化作用與機制研究[J]. 李小勇,劉雅.  中藥藥理與臨床. 2017(02)
[4]反芻獸月形單胞菌β-木糖苷酶基因在畢赤酵母中的高效表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)[J]. 付婷婷,胡瑋,陳勇,魏歡,楊光.  生物工程學(xué)報. 2017(05)
[5]阿拉伯木聚糖的氧化交聯(lián)與啤酒大麥麥芽過濾性能的相關(guān)性研究[J]. 周婷,金昭,高飛,蔡國林,陸健.  食品工業(yè)科技. 2015(11)
[6]阿拉伯呋喃糖苷水解酶對啤酒大麥麥芽過濾性能的影響[J]. 高飛,金昭,蔡國林,董建軍,陸健.  食品工業(yè)科技. 2014(14)
[7]新型α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶RuAra1的表達(dá)與鑒定[J]. 夏婷穎,周峻崗,呂紅.  復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版). 2014(01)
[8]低聚異麥芽糖生產(chǎn)工藝研究[J]. 嚴(yán)曉娟,陳朋,胡先望,梁寧.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(24)
[9]益生菌與結(jié)直腸癌發(fā)病的關(guān)系[J]. 楊靜,朱元民,劉玉蘭.  胃腸病學(xué). 2012(04)
[10]葡萄與葡萄酒單萜化合物的研究進(jìn)展[J]. 涂崔,潘秋紅,朱保慶,吳玉文,王志群,段長青.  園藝學(xué)報. 2011(07)

碩士論文
[1]β-木糖苷酶基因的克隆與重組表達(dá)及其酶學(xué)性質(zhì)研究[D]. 孔令加.云南大學(xué) 2016
[2]黑曲霉來源α-葡萄糖苷酶酶學(xué)性質(zhì)分析及應(yīng)用研究[D]. 王舒雅.天津科技大學(xué) 2014
[3]脂環(huán)酸芽孢桿菌A.contaminans α-葡萄糖苷酶純化與固定化研究[D]. 徐長云.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2011
[4]嗜熱棲熱菌（Thermus thermophilus）α-葡萄糖苷酶基因的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)分析[D]. 劉軍.北京化工大學(xué) 2006



本文編號：3201749