近年來,利用基因工程手段建構(gòu)出新的基因工程菌株,通過微生物大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)重組溶菌酶,對其產(chǎn)業(yè)化具有重要的意義。本課題采用山東大學(xué)構(gòu)建的一種甲醇誘導(dǎo)型產(chǎn)雞溶菌酶重組畢赤酵母菌株NCY-2的麥芽汁發(fā)酵液為研究對象,進(jìn)行離心、超濾、離子交換處理,優(yōu)化了蛋清溶菌酶的分離純化工藝參數(shù),得到的濃縮液,真空干燥制得溶菌酶粉末,研究了重組溶菌酶干酶粉的酶學(xué)性質(zhì),結(jié)果如下:（1）超濾條件的優(yōu)化:采用30 kDa的聚醚砜（PES）膜,優(yōu)化出最佳條件:跨膜壓力為0.20 MPa、pH 6.5,重組溶菌酶的收率為96.6%,酶活為2612.1 U·mL^-1,是原酶活的1.78倍。（2）離子交換條件的優(yōu)化:采用D152樹脂吸附、洗脫,優(yōu)化最佳的工藝條件:樹脂用量占料液體積比為15%,吸附時間4 h,洗脫液濃度為1.0 mol·L^-1,重組溶菌酶的酶活回收率為95.7%,酶活為3879.6 U·mL^-1,提高了0.5倍,是原酶活的3.1倍。（3）酶學(xué)性質(zhì)的研究:重組溶菌酶干酶粉對溶壁微球菌有抑制效果,酶活為12573.6 U·mg^-1

【文章來源】：煙臺大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 溶菌酶概述
        1.1.1 溶菌酶的研究歷程
        1.1.2 溶菌酶的特性與功能
        1.1.3 溶菌酶的作用機(jī)理
        1.1.4 溶菌酶的應(yīng)用現(xiàn)狀
    1.2 溶菌酶的提取方法
        1.2.1 超濾法
        1.2.2 離子交換法
        1.2.3 親和色譜法
        1.2.4 結(jié)晶法
        1.2.5 其他分離方法
    1.3 本研究的目的意義、主要研究內(nèi)容
        1.3.1 目的意義
        1.3.2 主要研究內(nèi)容
2 超濾膜在重組溶菌酶中的應(yīng)用
    2.1 實驗材料
        2.1.1 材料與試劑
        2.1.2 儀器與設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 重組溶菌酶發(fā)酵液的制備
        2.2.2 超濾
    2.3 分析方法
        2.3.1 菌體濃度的測定
        2.3.2 酶活力的測定
        2.3.3 膜性能的評價參數(shù)
        2.3.4 數(shù)據(jù)處理
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 重組溶菌酶發(fā)酵液的制備
        2.4.2 超濾
    2.5 小結(jié)
3 離子交換樹脂在重組溶菌酶中的應(yīng)用
    3.1 實驗材料
        3.1.1 材料與試劑
        3.1.2 儀器與設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 單因素實驗
        3.2.2 固定床吸附實驗
        3.2.3 正交實驗
        3.2.4 驗證實驗
    3.3 分析方法
        3.3.1 酶活回收率的計算
        3.3.2 樹脂處理方法
        3.3.3 樹脂性能評價參數(shù)
        3.3.4 數(shù)據(jù)處理
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 單因素實驗
        3.4.2 固定床吸附實驗
        3.4.3 正交實驗
        3.4.4 驗證實驗
    3.5 小結(jié)
4 重組溶菌酶的酶學(xué)特性研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 材料與試劑
        4.1.2 儀器與設(shè)備
        4.1.3 培養(yǎng)基
    4.2 實驗方法
        4.2.1 重組溶菌酶干酶粉的制備
        4.2.2 酶學(xué)性質(zhì)實驗
        4.2.3 抑菌實驗
    4.3 分析方法
        4.3.1 相對酶活的計算
        4.3.2 有關(guān)干酶粉的計算
        4.3.3 數(shù)據(jù)處理
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 重組溶菌酶干酶粉的制備
        4.4.2 酶學(xué)性質(zhì)實驗
        4.4.3 抑菌實驗
    4.5 小結(jié)
5 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3201241