目的:探討20S蛋白酶體β5亞單位（PSMB5）對(duì)小鼠神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）增殖和分化能力的影響。方法:體外分離培養(yǎng)新生BALB/c小鼠（P0）的NSCs,應(yīng)用免疫熒光染色觀察PSMB5在NSCs中的表達(dá)與分布;利用real time RT-PCR方法檢測(cè)PSMB5 mRNA的表達(dá);熒光分光光度法測(cè)定PSMB5相關(guān)的糜蛋白酶活性的變化;應(yīng)用PSMB5-siRNA抑制P0 NSCs中PSMB5基因的表達(dá);使用含有PSMB5基因的重組慢病毒（（lentiPSMB5））感染成年小鼠（P90） NSCs。利用CCK-8試驗(yàn)檢測(cè)PSMB5對(duì)NSCs增殖能力的影響,利用BrdU和Tuj1染色觀察PSMB5基因敲低和過(guò)表達(dá)對(duì)NSCs增殖及分化能力的影響。結(jié)果:PSMB5主要分布于NSCs的胞漿,P0的NSCs分化后,PSMB5 mRNA的表達(dá)下調(diào)。成年和老年小鼠NSCs中糜蛋白酶體活性較新生小鼠顯著降低。PSMB5敲減后NSCs增殖能力和向神經(jīng)元分化能力減弱,PSMB5過(guò)表達(dá)后NSCs增殖能力和向神經(jīng)元分化能力增強(qiáng)。結(jié)論:PSMB5可能參與小鼠NSCs增殖及分化的調(diào)控。 

【文章來(lái)源】：神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2020,36(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 試劑
    2 方法
        2.1 分離培養(yǎng)NSCs
        2.2 NSCs貼壁培養(yǎng)
        2.3 NSCs分化培養(yǎng)
        2.4 PSMB5-siRNA干擾實(shí)驗(yàn)
        2.5 PSMB5基因過(guò)表達(dá)模型構(gòu)建
        2.6 免疫熒光染色
        2.7 real time RT-PCR檢測(cè)
        2.8 糜蛋白酶活性檢測(cè)
        2.9 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        3.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1 PSMB5與Nestin共表達(dá)于NSCs內(nèi)
    2分化后的NSCs蛋白酶體各相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平
    3 P90、P540 NSCs中PSMB5相關(guān)的糜蛋白酶樣活性下調(diào)
    4 PSMB5基因沉默對(duì)P0 NSCs的影響
        4.1 PSMB5下調(diào)可使P0 NSCs增殖能力下降
        4.2 PSMB5基因沉默抑制P0 NSCs向神經(jīng)元方向分化
    5 過(guò)表達(dá)PSMB5對(duì)P90 NSCs的影響
        5.1 PSMB5慢病毒驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率
        5.2 過(guò)表達(dá)PSMB5促進(jìn)P90 NSCs的增殖潛能
        5.3 過(guò)表達(dá)PSMB5促進(jìn)P90 NSCs的分化潛能
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]靶向PSMB5基因的shRNA慢病毒載體對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化潛能的影響[J]. 李睿,黃菲菲,陸利,趙云鶴.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2017(05)
[2]PSMB5基因過(guò)表達(dá)促人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化[J]. 李程浩,趙晨,賀嬋婷,陸利,楊桂姣.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2015(04)



本文編號(hào)：3200854