α冠狀病毒（Alphacoronavirus,α-CoV）成員眾多,主要包括人冠狀病毒229E（Human Coronavirus 229E,HCoV-229E）、人冠狀病毒NL63（Human Coronavirus NL63,HCoV-NL63）、豬傳染性胃腸炎病毒（Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、貓傳染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus,FIPV）、豬呼吸道冠狀病毒（Porcine despiratory coronavirus,PRCV）和豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒（Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）。它們能夠引起人和動物的呼吸道、消化道、肝臟以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病,對人類生命財(cái)產(chǎn)安全造成嚴(yán)重危害。非結(jié)構(gòu)蛋白1（Nonstructure protein 1,nsp1）是冠狀病毒編碼的多聚蛋白（Polyprote... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviation）
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 冠狀病毒
        1.1.1 冠狀病毒的概況
        1.1.2 冠狀病毒的分類
        1.1.3 冠狀病毒的基因組
    1.2 α冠狀病毒
        1.2.1 人冠狀病毒的概述
        1.2.2 豬冠狀病毒的概述
        1.2.3 貓冠狀病毒的概述
    1.3 冠狀病毒nsp1蛋白
        1.3.1 nsp1蛋白的功能機(jī)制
        1.3.2 nsp1蛋白的結(jié)構(gòu)
    1.4 研究目的及意義
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞、菌株、毒株和動物
        2.1.2 載體與質(zhì)粒
        2.1.3 主要試劑耗材
        2.1.4 抗體
        2.1.5 重要儀器設(shè)備
        2.1.6 主要試劑配制
        2.1.7 軟件及數(shù)據(jù)庫
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 nsp1基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 nsp1蛋白表達(dá)和純化
        2.2.3 nsp1蛋白晶體結(jié)構(gòu)解析
        2.2.4 nsp1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 去內(nèi)毒素小提質(zhì)粒
        2.2.6 nsp1蛋白生化實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 構(gòu)建重組病毒質(zhì)粒
        2.2.8 BAC質(zhì)粒的提取
        2.2.9 重組病毒的拯救及擴(kuò)增
        2.2.10 病毒生長曲線的測定
        2.2.11 重組病毒對仔豬的致病力
        2.2.12 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 nsp1蛋白純化及晶體結(jié)構(gòu)解析
        3.1.1 nsp1基因原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.2 nsp1蛋白的原核表達(dá)及純化
        3.1.3 nsp1蛋白結(jié)晶條件初篩和優(yōu)化
        3.1.4 nsp1 蛋白晶體的凍存和數(shù)據(jù)收集
        3.1.5 nsp1 蛋白晶體結(jié)構(gòu)的解析
    3.2 nsp1氨基酸序列和晶體結(jié)構(gòu)的同源性
        3.2.1 冠狀病毒nsp1氨基酸序列的同源性
        3.2.2 冠狀病毒nsp1晶體結(jié)構(gòu)的同源性
    3.3 α冠狀病毒nsp1對宿主基因的影響
        3.3.1 α冠狀病毒nsp1對海參熒光素酶基因的作用
        3.3.2 α冠狀病毒nsp1對整體宿主蛋白合成的影響
    3.4 α冠狀病毒nsp1抑制宿主蛋白合成的關(guān)鍵區(qū)域
        3.4.1 PEDV nsp1 抑制宿主合成的關(guān)鍵區(qū)域
        3.4.2 TGEV nsp1 抑制宿主合成的關(guān)鍵區(qū)域
        3.4.3 TGEV nsp1 的關(guān)鍵區(qū)域?qū)ζ浣Y(jié)構(gòu)穩(wěn)定的影響
        3.4.4 91-95這段區(qū)域在其它α冠狀病毒nsp1中的作用
    3.5 突變nsp1 重要區(qū)域?qū)Ζ凉跔畈《綯GEV的影響
        3.5.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.5.2 重組病毒的拯救
        3.5.3 重組病毒在易感細(xì)胞上的復(fù)制
        3.5.4 重組病毒對初生仔豬的致病力
    3.6 研究α冠狀病毒nsp1發(fā)揮生物功能的機(jī)制
        3.6.1 從結(jié)構(gòu)角度闡述α和β冠狀病毒nsp1的分子機(jī)制
        3.6.2 α冠狀病毒nsp1作用于哺乳動物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄組學(xué)
        3.6.3 α冠狀病毒nsp1對干擾素方面的影響
        3.6.4 α冠狀病毒nsp1對細(xì)胞周期的影響
第4章 討論
    4.1 α冠狀病毒nsp1全長的晶體結(jié)構(gòu)
    4.2 Motif（91-95 aa）是α冠狀病毒nsp1 抑制宿主基因表達(dá)的重要區(qū)域
    4.3 突變nsp1關(guān)鍵區(qū)域不影響α冠狀病毒的復(fù)制,但會顯著減弱其致病力
    4.4 α冠狀病毒nsp1能夠調(diào)節(jié)干擾素及細(xì)胞周期
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1 合成的nsp1基因核苷酸序列
    附錄2 實(shí)驗(yàn)所用引物信息
    附錄3 在讀期間研究成果
    附錄4 個人資料
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2008-2018年我國豬流行性腹瀉病毒混合感染分析[J]. 王顥然,高利,高翔,肖建華.  中國動物傳染病學(xué)報(bào). 2020(03)
[2]雞傳染性支氣管炎的防治[J]. 廖思鳳.  養(yǎng)殖與飼料. 2019(04)
[3]貓傳染性腹膜炎防治[J]. 張健.  畜禽業(yè). 2018(12)
[4]豬流行性腹瀉的綜合防治措施[J]. 王廣俊.  當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè). 2018(12)
[5]豬傳染性胃腸炎防治[J]. 黃漢志.  今日畜牧獸醫(yī). 2018(09)
[6]貓傳染性腹膜炎研究進(jìn)展[J]. 王廣龍,王勇,戴健濤,王曉楓,徐家付,姜夢,白文順,楊亮宇,汪善榮.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(07)
[7]豬流行性腹瀉和豬傳染性胃腸炎疫苗研究進(jìn)展[J]. 方博,劉乙興,張桂紅.  廣東飼料. 2018(02)
[8]豬流行性腹瀉病毒疫苗的研究進(jìn)展[J]. 姜威.  中國畜牧業(yè). 2018(03)
[9]PEDV在全球范圍內(nèi)的流行與傳播[J]. 翁善鋼.  中國畜牧業(yè). 2016(11)
[10]中東呼吸綜合征的研究進(jìn)展[J]. 韓志英,劉盼,辛彥娜,丁亞麗,普珍,陳曉麗,卞志紅,張海琴.  西藏醫(yī)藥. 2015(03)



本文編號：3157973