DNA損傷修復(fù)是生命體維持基因組遺傳穩(wěn)定的重要手段,對(duì)植株生長發(fā)育至關(guān)重要。研究DNA損傷修復(fù)的分子機(jī)制,為培育耐受紫外線輻射的植物、確保惡劣環(huán)境下的糧食增產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。近年來的報(bào)道顯示,作為一種泛素密碼,K27鏈接類型泛素鏈參與DNA損傷修復(fù)過程調(diào)控。因此,研究K27鏈接類型泛素鏈的識(shí)別及調(diào)控機(jī)制,為培育新品種植株以及在惡劣環(huán)境下保證糧食產(chǎn)量具有重要意義。泛素化是一種重要的翻譯后修飾,在真核生物中廣泛存在。通過對(duì)底物蛋白的修飾,泛素化在植物生長發(fā)育調(diào)控中扮演了重要的調(diào)控角色。泛素分子之間可通過異肽鍵形成不同結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的泛素鏈,即泛素密碼。泛素密碼的不同生物學(xué)功能由其分子結(jié)構(gòu)特征所決定。K27鏈接類型泛素鏈?zhǔn)菂⑴cDNA損傷修復(fù)的主要泛素密碼。目前唯一報(bào)道的K27鏈接類型二泛素（K27 diub）的特異性識(shí)別蛋白是去泛素化酶UCHL3。UCHL3可通過對(duì)底物RAD51多聚泛素鏈的剪切參與DNA損傷修復(fù)過程。值得注意的是,迄今為止的研究顯示,UCHL3在體外只能切割Ub-AMC,不能對(duì)任何類型的泛素鏈進(jìn)行切割。UCHL3上75位絲氨酸(Ser⁷⁵)發(fā)生的磷酸化,會(huì)使其... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 泛素密碼
        1.1.1 蛋白質(zhì)泛素化
        1.1.2 泛素鏈類型及功能
    1.2 去泛素化酶
        1.2.1 去泛素化酶種類
        1.2.2 去泛素化酶功能
    1.3 去泛素化酶UCHL
        1.3.1 UCHL3 蛋白功能
        1.3.2 UCHL3 蛋白翻譯后調(diào)控機(jī)制
        1.3.3 UCHL3與K27 鏈接類型泛素鏈
    1.4 本課題的研究內(nèi)容與意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 分子克隆
        2.2.2 蛋白質(zhì)表達(dá)與純化
        2.2.3 K27 鏈接類型二泛素的合成
        2.2.4 蛋白復(fù)合物的組裝
        2.2.5 晶體生長與優(yōu)化
        2.2.6 晶體數(shù)據(jù)收集
        2.2.7 晶體結(jié)構(gòu)解析
        2.2.8 晶體結(jié)構(gòu)分析
        2.2.9 蛋白相互作用檢測(cè)
        2.2.10 Ub-AMC 單泛素切割實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 泛素鏈切割實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 序列比對(duì)以及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
第三章 K27 鏈接類型二泛素與UCHL3 復(fù)合物結(jié)構(gòu)解析
    3.1 K27 鏈接類型二泛素與UCHL3 復(fù)合物獲取
        3.1.1 UCHL3 蛋白獲取
        3.1.2 UCHL3 與泛素鏈相互作用力檢測(cè)
        3.1.3 K27 鏈接類型二泛素與UCHL3 復(fù)合物獲取
    3.2 K27 鏈接類型二泛素與UCHL3 復(fù)合物結(jié)構(gòu)解析
        3.2.1 K27 鏈接類型二泛素與UCHL3 復(fù)合物晶體獲取
        3.2.2 K27 鏈接類型二泛素與UCHL3 復(fù)合物數(shù)據(jù)收集與結(jié)構(gòu)解析
    3.3 總結(jié)
第四章 K27 鏈接類型二泛素被UCHL3 識(shí)別機(jī)制分析
    4.1 K27 鏈接類型二泛素與UCHL3 復(fù)合物結(jié)構(gòu)分析
        4.1.1 泛素結(jié)合位點(diǎn)S
        4.1.2 泛素結(jié)合位點(diǎn)S
    4.2 K27 鏈接類型二泛素與UCHL3 復(fù)合物結(jié)構(gòu)驗(yàn)證
        4.2.1 點(diǎn)突變?cè)O(shè)計(jì)與蛋白獲取
        4.2.2 相互作用力驗(yàn)證
    4.3 結(jié)構(gòu)比對(duì)與分析
    4.4 總結(jié)與討論
第五章 磷酸化UCHL3 體外生化研究
    5.1 磷酸化UCHL3 蛋白獲取
    5.2 磷酸化UCHL3 體外活性檢測(cè)
    5.3 UCHL3 序列比對(duì)與系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
    5.4 總結(jié)與討論
第六章 全文結(jié)論
    主要結(jié)論
    展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號(hào)：3155194