PTPN12（Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 12）是編碼人源PEST蛋白的基因,位于人常染色體7q11.23,在造血系統(tǒng)的相關細胞中高度表達,且主要表達在細胞質中。它由N端的催化結構域和C端的調節(jié)結構域組成,N端具有酪氨酸磷酸酶家族的高度保守特定基序,而親水C端富含脯氨酸、谷氨酸、絲氨酸和蘇氨酸,調節(jié)PEST與底物蛋白的相互作用。有研究表明,PTP-PEST通過對含有磷酸基團的信號分子的去磷酸化作用在細胞遷移、細胞增殖及細胞分化等生理過程中發(fā)揮著關鍵的作用。目前,研究者們發(fā)現(xiàn)PTPPEST蛋白水平的降低與已知的幾種癌癥相關,但有關PEST功能及PEST對腫瘤的發(fā)生發(fā)展的研究報道仍十分有限,需要進一步探討PEST對腫瘤細胞的影響。CRISPR/Cas9是一項全新基因編輯技術,它具有高效率、高特異性、高精準度等優(yōu)點,并且操作簡單、快速,近年來迅速發(fā)展成為炙手可熱的新方法。CRISPR/Cas9系統(tǒng)由CRISPR相關基因和Cas9核酸內切酶組成。利用與目的基因同源的sgRNA,特異性結合靶細胞基因組的DNA序列,形成雜合雙鏈。C... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫詞
第1章 緒論
    1.1 蛋白質磷酸酶的概述
        1.1.1 蛋白質磷酸酶的概念及分類
        1.1.2 PTP-PEST
    1.2 CRISPR/Cas9 基因編輯技術
        1.2.1 CRISPR/Cas系統(tǒng)的組成
        1.2.2 CRISPR/Cas9 作用原理
        1.2.3 CRISPR/Cas9 技術應用
    1.3 本課題的研究目的及意義
第2章 PTPN12 基因敲除A549 穩(wěn)定細胞株的構建
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 菌株、載體和細胞培養(yǎng)
        2.1.3 實驗耗材與儀器設備
        2.1.4 試劑配置
    2.2 實驗方法
        2.2.1 重組質粒的構建
        2.2.2 細胞系的選擇
        2.2.3 A549 穩(wěn)定細胞株的篩選
        2.2.4 PTPN12 基因敲除A549 穩(wěn)定細胞株的鑒定
    2.3 結果及分析
        2.3.1 重組質粒的構建
        2.3.2 PTP-PEST在不同細胞系中的表達水平
        2.3.3 PTPN12 基因敲除A549 穩(wěn)定細胞株
    2.4 本章小結
第3章 PTPN12 基因對A549 細胞增殖、遷移的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗試劑
        3.1.2 實驗耗材與儀器
        3.1.3 溶液配置
        3.1.4 菌株、載體、細胞
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞原位計數(shù)試驗
        3.2.2 CCK-8 細胞增殖的檢測
        3.2.3 吉姆薩細胞染色
        3.2.4 細胞周期的檢測
        3.2.5 細胞劃痕實驗
        3.2.6 統(tǒng)計學分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 細胞原位計數(shù)實驗結果
        3.3.2 CCK8 細胞增殖實驗結果
        3.3.3 吉姆薩細胞染色實驗結果
        3.3.4 細胞周期的檢測結果
        3.3.5 細胞劃痕實驗結果
    3.4 本章小結
討論
參考文獻
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]基因編輯技術:進展與挑戰(zhàn)[J]. 盧俊南,褚鑫,潘燕平,陳映羲,溫欒,戴俊彪.  中國科學院院刊. 2018(11)
[2]CRISPR/Cas9技術的脫靶效應及優(yōu)化策略[J]. 郭全娟,韓秋菊,張建.  生物化學與生物物理進展. 2018(08)
[3]利用CRISPR/Cas9n double nick系統(tǒng)構建人DNAH2基因敲除的U2OS細胞株[J]. 常麗賢,孫聰聰,陳曉娟,楊文鈺,張家源,張英弛,袁衛(wèi)平,竺曉凡.  生物工程學報. 2017(02)
[4]CRISPR/Cas9的應用及脫靶效應研究進展[J]. 鄭武,谷峰.  遺傳. 2015(10)



本文編號：3147648