PTPN12（Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 12）是編碼人源PEST蛋白的基因,位于人常染色體7q11.23,在造血系統(tǒng)的相關(guān)細(xì)胞中高度表達(dá),且主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中。它由N端的催化結(jié)構(gòu)域和C端的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域組成,N端具有酪氨酸磷酸酶家族的高度保守特定基序,而親水C端富含脯氨酸、谷氨酸、絲氨酸和蘇氨酸,調(diào)節(jié)PEST與底物蛋白的相互作用。有研究表明,PTP-PEST通過(guò)對(duì)含有磷酸基團(tuán)的信號(hào)分子的去磷酸化作用在細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖及細(xì)胞分化等生理過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。目前,研究者們發(fā)現(xiàn)PTPPEST蛋白水平的降低與已知的幾種癌癥相關(guān),但有關(guān)PEST功能及PEST對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展的研究報(bào)道仍十分有限,需要進(jìn)一步探討PEST對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響。CRISPR/Cas9是一項(xiàng)全新基因編輯技術(shù),它具有高效率、高特異性、高精準(zhǔn)度等優(yōu)點(diǎn),并且操作簡(jiǎn)單、快速,近年來(lái)迅速發(fā)展成為炙手可熱的新方法。CRISPR/Cas9系統(tǒng)由CRISPR相關(guān)基因和Cas9核酸內(nèi)切酶組成。利用與目的基因同源的sgRNA,特異性結(jié)合靶細(xì)胞基因組的DNA序列,形成雜合雙鏈。C... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫詞
第1章 緒論
    1.1 蛋白質(zhì)磷酸酶的概述
        1.1.1 蛋白質(zhì)磷酸酶的概念及分類
        1.1.2 PTP-PEST
    1.2 CRISPR/Cas9 基因編輯技術(shù)
        1.2.1 CRISPR/Cas系統(tǒng)的組成
        1.2.2 CRISPR/Cas9 作用原理
        1.2.3 CRISPR/Cas9 技術(shù)應(yīng)用
    1.3 本課題的研究目的及意義
第2章 PTPN12 基因敲除A549 穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 菌株、載體和細(xì)胞培養(yǎng)
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材與儀器設(shè)備
        2.1.4 試劑配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 細(xì)胞系的選擇
        2.2.3 A549 穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選
        2.2.4 PTPN12 基因敲除A549 穩(wěn)定細(xì)胞株的鑒定
    2.3 結(jié)果及分析
        2.3.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.2 PTP-PEST在不同細(xì)胞系中的表達(dá)水平
        2.3.3 PTPN12 基因敲除A549 穩(wěn)定細(xì)胞株
    2.4 本章小結(jié)
第3章 PTPN12 基因?qū)549 細(xì)胞增殖、遷移的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材與儀器
        3.1.3 溶液配置
        3.1.4 菌株、載體、細(xì)胞
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞原位計(jì)數(shù)試驗(yàn)
        3.2.2 CCK-8 細(xì)胞增殖的檢測(cè)
        3.2.3 吉姆薩細(xì)胞染色
        3.2.4 細(xì)胞周期的檢測(cè)
        3.2.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 細(xì)胞原位計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.2 CCK8 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.3 吉姆薩細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.4 細(xì)胞周期的檢測(cè)結(jié)果
        3.3.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 本章小結(jié)
討論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基因編輯技術(shù):進(jìn)展與挑戰(zhàn)[J]. 盧俊南,褚鑫,潘燕平,陳映羲,溫欒,戴俊彪.  中國(guó)科學(xué)院院刊. 2018(11)
[2]CRISPR/Cas9技術(shù)的脫靶效應(yīng)及優(yōu)化策略[J]. 郭全娟,韓秋菊,張建.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2018(08)
[3]利用CRISPR/Cas9n double nick系統(tǒng)構(gòu)建人DNAH2基因敲除的U2OS細(xì)胞株[J]. 常麗賢,孫聰聰,陳曉娟,楊文鈺,張家源,張英弛,袁衛(wèi)平,竺曉凡.  生物工程學(xué)報(bào). 2017(02)
[4]CRISPR/Cas9的應(yīng)用及脫靶效應(yīng)研究進(jìn)展[J]. 鄭武,谷峰.  遺傳. 2015(10)



本文編號(hào)：3147648