日本腦炎（Japanese encephalitis,JE）是亞洲地區(qū)常見的一種病毒性腦炎,是由日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一種蚊媒傳播的人獸共患傳染病,豬是最主要的傳染源和擴增宿主。我國是一個養(yǎng)豬大國,JE在豬群中的流行相當(dāng)普遍,感染后雖不會導(dǎo)致較高的死亡率,但會導(dǎo)致公豬睪丸炎和妊娠母豬流產(chǎn),給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。本研究通過采用RT-PCR、間接免疫熒光和病毒分離等實驗室技術(shù)對上海市奉賢區(qū)某豬場疑似感染JE的病豬樣品進行檢測,從流產(chǎn)胎兒腦組織中分離到一株JEV,命名SD12株,并對其全基因進行測序分析,構(gòu)建遺傳進化樹,鑒定為GⅠ JEV。在此基礎(chǔ)上建立了小鼠感染模型,研究其在小鼠體內(nèi)的動態(tài)分布,測定病毒滴度及生物學(xué)特性并對其分子進化情況進行了分析。鑒于目前我國GⅠ/Ⅲ JEV共同流行的趨勢,為快速、高效檢測臨床和實驗樣本中的JEV載量及其基因型,本研究通過對WHV、DENV、ZIKV和GⅠ/Ⅲ JEV毒株序列比對分析,設(shè)計特異的探針,建立了區(qū)分GⅠ/Ⅲ JEV的Taq Man RT-q PCR方法。經(jīng)驗證該方法具有良好的靈... 

【文章來源】：長江大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1 引言
        1.1 乙型腦炎病毒概述
        1.2 乙型腦炎病毒基因組結(jié)構(gòu)及編碼蛋白功能概述
        1.3 乙型腦炎病毒基因型及其轉(zhuǎn)變研究概述
        1.4 乙型腦炎病毒疫苗研究與使用概述
    2 研究目的與意義
第二章 GⅠ JEV分離、鑒定與分子特征分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 RT-PCR鑒定
        2.2 病毒分離
        2.3 間接免疫熒光染色試驗
50和TCID₅₀">        2.4 LD₅₀和TCID50

        2.5 序列分析
        2.6 遺傳進化分析
    3 討論
第三章 GⅠ/Ⅲ JEV TaqMan RT-qPCR檢測方法的建立
    1 材料和方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 TaqMan RT-qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.2 TaqMan RT-qPCR特異性檢驗
        2.3 TaqMan RT-qPCR的靈敏度和重復(fù)性
        2.4 臨床樣本檢測
    3 討論
第四章 GⅠ SD12 在 C57BL/6 小鼠體內(nèi)感染模型建立
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的臨床癥狀
        2.2 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的生存曲線
        2.3 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的腦組織病理切片
        2.4 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的組織病毒檢測
    3 討論
第五章 JEV SD-F120 株在小鼠體內(nèi)安全性和免疫原性研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 GⅠ JEV SD12 株在小鼠體內(nèi)感染劑量篩選
        2.2 GⅢ JEV NJ28 株在小鼠體內(nèi)感染劑量篩選
        2.3 GⅢ JEV SA14-14-2 株在小鼠體內(nèi)交叉保護
        2.4 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠體內(nèi)交叉保護
        2.5 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠體內(nèi)安全性
        2.6 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠體內(nèi)免疫原性
    3 討論
第六章 JEV SD-F120 株在豬體內(nèi)安全性和免疫原性研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 GⅠ JEV SD-F120 株在豬體內(nèi)安全性
        2.2 GⅠ JEV SD-F120 株在豬體內(nèi)免疫原性
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬乙型腦炎的病狀與防控[J]. 蔡越,周曉蔓.  今日畜牧獸醫(yī). 2019(10)
[2]2012-2016年畢節(jié)市自然疫源及蟲媒傳染病流行病學(xué)特征分析[J]. 吳芳,陳淑媛,劉國琴.  現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué). 2019(01)
[3]豬乙型腦炎滅活疫苗安全性與免疫效力的研究[J]. 賴月輝,牛曉蕓,牛貝貝,朱煒斌,李嘉愛,黃秋雪,齊冬梅.  廣東畜牧獸醫(yī)科技. 2018(04)
[4]中華按蚊源日本腦炎病毒的分離鑒定及其分子特征的分析[J]. 劉茜倩,魏建超,鐘登科,吳亞玲,石坤,張克龍,陸美林,肖長廣,李蓓蓓,劉珂,邵東華,邱亞峰,石元元,馬志永,范紅結(jié).  中國獸醫(yī)科學(xué). 2017(01)
[5]乙型腦炎病毒及其疫苗最新研究進展[J]. 郭楊,林華.  中國生物工程雜志. 2015(10)
[6]Flexible空間掃描統(tǒng)計量在甘肅省自然疫源性疾病空間聚集性研究中的應(yīng)用[J]. 魏孔福,劉新鳳,任曉衛(wèi),劉東鵬,劉海霞,鄭蕓鶴,成瑤,蔣小娟,楊筱婷,李治平,茍發(fā)香,孟蕾.  中國媒介生物學(xué)及控制雜志. 2015(05)
[7]乙型腦炎減毒活疫苗毒力穩(wěn)定性分析[J]. 楊邦玲,王洪強,王凱,王曉丹,李玉華.  中國生物制品學(xué)雜志. 2014(12)
[8]Molecular Characterization of Full-length Genome of Japanese Encephalitis Virus Genotype V Isolated from Tibet, China[J]. LI Ming Hua,FU Shi Hong,CHEN Wei Xin,WANG Huan Yu,CAO Yu Xi,LIANG Guo Dong.  Biomedical and Environmental Sciences. 2014(04)
[9]我國流行性乙型腦炎研究近況[J]. 蔡寶祥.  畜牧與獸醫(yī). 2012(07)
[10]豬乙型腦炎的診斷與綜合防控[J]. 陳宏.  養(yǎng)殖技術(shù)顧問. 2010(08)

碩士論文
[1]豬乙型腦炎病毒滅活疫苗佐劑篩選及免疫效果評估[D]. 劉洪明.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]豬乙型腦炎病毒的分離鑒定、致弱及間接ELISA檢測方法的建立[D]. 張麗穎.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]河南省乙型腦炎病毒的分離鑒定及分子特性分析[D]. 楊猛.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號：3147597

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