日本腦炎（Japanese encephalitis,JE）是亞洲地區(qū)常見(jiàn)的一種病毒性腦炎,是由日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一種蚊媒傳播的人獸共患傳染病,豬是最主要的傳染源和擴(kuò)增宿主。我國(guó)是一個(gè)養(yǎng)豬大國(guó),JE在豬群中的流行相當(dāng)普遍,感染后雖不會(huì)導(dǎo)致較高的死亡率,但會(huì)導(dǎo)致公豬睪丸炎和妊娠母豬流產(chǎn),給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過(guò)采用RT-PCR、間接免疫熒光和病毒分離等實(shí)驗(yàn)室技術(shù)對(duì)上海市奉賢區(qū)某豬場(chǎng)疑似感染JE的病豬樣品進(jìn)行檢測(cè),從流產(chǎn)胎兒腦組織中分離到一株JEV,命名SD12株,并對(duì)其全基因進(jìn)行測(cè)序分析,構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹,鑒定為GⅠ JEV。在此基礎(chǔ)上建立了小鼠感染模型,研究其在小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布,測(cè)定病毒滴度及生物學(xué)特性并對(duì)其分子進(jìn)化情況進(jìn)行了分析。鑒于目前我國(guó)GⅠ/Ⅲ JEV共同流行的趨勢(shì),為快速、高效檢測(cè)臨床和實(shí)驗(yàn)樣本中的JEV載量及其基因型,本研究通過(guò)對(duì)WHV、DENV、ZIKV和GⅠ/Ⅲ JEV毒株序列比對(duì)分析,設(shè)計(jì)特異的探針,建立了區(qū)分GⅠ/Ⅲ JEV的Taq Man RT-q PCR方法。經(jīng)驗(yàn)證該方法具有良好的靈... 

【文章來(lái)源】：長(zhǎng)江大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1 引言
        1.1 乙型腦炎病毒概述
        1.2 乙型腦炎病毒基因組結(jié)構(gòu)及編碼蛋白功能概述
        1.3 乙型腦炎病毒基因型及其轉(zhuǎn)變研究概述
        1.4 乙型腦炎病毒疫苗研究與使用概述
    2 研究目的與意義
第二章 GⅠ JEV分離、鑒定與分子特征分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果
        2.1 RT-PCR鑒定
        2.2 病毒分離
        2.3 間接免疫熒光染色試驗(yàn)
50和TCID₅₀">        2.4 LD₅₀和TCID50

        2.5 序列分析
        2.6 遺傳進(jìn)化分析
    3 討論
第三章 GⅠ/Ⅲ JEV TaqMan RT-qPCR檢測(cè)方法的建立
    1 材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果
        2.1 TaqMan RT-qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.2 TaqMan RT-qPCR特異性檢驗(yàn)
        2.3 TaqMan RT-qPCR的靈敏度和重復(fù)性
        2.4 臨床樣本檢測(cè)
    3 討論
第四章 GⅠ SD12 在 C57BL/6 小鼠體內(nèi)感染模型建立
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果
        2.1 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的臨床癥狀
        2.2 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的生存曲線
        2.3 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的腦組織病理切片
        2.4 GⅠ JEV SD12 感染C57BL/6 小鼠的組織病毒檢測(cè)
    3 討論
第五章 JEV SD-F120 株在小鼠體內(nèi)安全性和免疫原性研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果
        2.1 GⅠ JEV SD12 株在小鼠體內(nèi)感染劑量篩選
        2.2 GⅢ JEV NJ28 株在小鼠體內(nèi)感染劑量篩選
        2.3 GⅢ JEV SA14-14-2 株在小鼠體內(nèi)交叉保護(hù)
        2.4 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠體內(nèi)交叉保護(hù)
        2.5 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠體內(nèi)安全性
        2.6 GⅠ JEV SD-F120 株在小鼠體內(nèi)免疫原性
    3 討論
第六章 JEV SD-F120 株在豬體內(nèi)安全性和免疫原性研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果
        2.1 GⅠ JEV SD-F120 株在豬體內(nèi)安全性
        2.2 GⅠ JEV SD-F120 株在豬體內(nèi)免疫原性
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]我國(guó)流行性乙型腦炎研究近況[J]. 蔡寶祥.  畜牧與獸醫(yī). 2012(07)
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碩士論文
[1]豬乙型腦炎病毒滅活疫苗佐劑篩選及免疫效果評(píng)估[D]. 劉洪明.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]豬乙型腦炎病毒的分離鑒定、致弱及間接ELISA檢測(cè)方法的建立[D]. 張麗穎.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]河南省乙型腦炎病毒的分離鑒定及分子特性分析[D]. 楊猛.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3147597

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