目的研究人間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）來源的外泌體對(duì)單核細(xì)胞增殖和分泌炎性因子的影響,初步探討外泌體的免疫調(diào)節(jié)功能。方法離心法培養(yǎng)hMSCs,收集培養(yǎng)的hMSCs上清液,利用試劑盒提取外泌體,電鏡下觀察其結(jié)構(gòu),Western blot檢測(cè)其CD63和CD81的表達(dá)水平。密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞,在培養(yǎng)的單核細(xì)胞中加入外泌體,MTT法檢測(cè)單核細(xì)胞的增殖情況,流式細(xì)胞儀檢測(cè)其凋亡情況,ELISA法檢測(cè)上清液中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）及白介素-8（IL-8）的分泌量。結(jié)果 hMSCs來源的外泌體在透射電鏡下呈小球狀,Western blot顯示外泌體CD63和CD81表達(dá)陽性。MTT檢測(cè)顯示,在LPS的刺激下,單核細(xì)胞增殖增加;加入外泌體后單核細(xì)胞的增殖受到抑制。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明外泌體具有促進(jìn)單核細(xì)胞凋亡的作用。ELISA檢測(cè)結(jié)果表明,外泌體能夠抑制炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-8的分泌。結(jié)論 h MSCs來源的exosmes能夠抑制單核細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡,同時(shí)抑制了單核細(xì)胞分泌炎性因子TNF-α、I... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,55(07)北大核心

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外泌體的鑒定

在LPS的刺激下,單核細(xì)胞增殖增加,生長(zhǎng)曲線呈典型的“S”型;而加入外泌體后單核細(xì)胞的增殖受到抑制。終濃度為1 mg/L 的外泌體對(duì)單核細(xì)胞增殖的抑制作用不明顯;終濃度為10、50和100 mg/L的外泌體均能抑制單核細(xì)胞的增殖,隨著濃度的增加,抑制作用明顯,顯示劑量依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖2。2.3 外泌體對(duì)單核細(xì)胞凋亡的影響

hMSCs來源的外泌體具有促進(jìn)單核細(xì)胞凋亡的作用,實(shí)驗(yàn)組(圖3A)的早期凋亡率(B4:13.8%)、晚期凋亡率(B2:9.5%)以及總凋亡率(B2+B4:23.3%)均高于對(duì)照組(圖3B)。圖4 ELISA檢測(cè)外泌體對(duì)單核細(xì)胞分泌炎性因子的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]采用高速離心及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體比較及鑒定[J]. 韓金秀,李宏遠(yuǎn),撒亞蓮,嚴(yán)丹,賀繼剛.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(04)
[2]MicroRNA-29a在脂多糖誘導(dǎo)人單核細(xì)胞凋亡中的作用和機(jī)制[J]. 熊旭明,張振輝,江子欣,陳偉燕,楊其霖,劉衛(wèi)江.  中華急診醫(yī)學(xué)雜志. 2013 (01)



本文編號(hào)：3116970