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利用DNA重組技術(shù)生產(chǎn)L-苯丙氨酸的研究

發(fā)布時間:2021-03-29 11:30
  L-苯丙氨酸(L-phenylalanine,L-Phe)是人體八大必須氨基酸之一,在人類的新陳代謝中起著重要的作用。而現(xiàn)在生產(chǎn)L-Phe的技術(shù)還遠遠滿足不了市場的需求,本研究目的是利用DNA重組技術(shù)以及微生物發(fā)酵的方法提高L-Phe產(chǎn)量。研究方法包括利用易錯PCR技術(shù)對rpo A基因進行點突變建立一個基因庫,通過突變作用于rpo A的正常轉(zhuǎn)錄從而調(diào)控工程菌株產(chǎn)生L-Phe的量;利用質(zhì)粒ptrc99a作為載體轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細胞中,并從中篩選出高產(chǎn)菌株;通過質(zhì)粒的構(gòu)建、篩選、驗證、發(fā)酵等一系列試驗,結(jié)果表明工程菌株構(gòu)建成功,為L-Phe規(guī);a(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。 

【文章來源】:天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報. 2020,27(02)

【文章頁數(shù)】:6 頁

【部分圖文】:

利用DNA重組技術(shù)生產(chǎn)L-苯丙氨酸的研究


rpoA基因電泳凝膠結(jié)果

變化曲線,產(chǎn)量,苯丙氨酸,變化曲線


經(jīng)發(fā)酵數(shù)據(jù)分析,從發(fā)酵開始到第26 h發(fā)酵菌株處于自身生長期,并沒有L-苯丙氨酸產(chǎn)生,并且在第24 h溶氧達到40 mg/L時,開始與通氣量耦聯(lián),此時溫度調(diào)為38℃,從第28 h開始的取樣中測得有L-苯丙氨酸的產(chǎn)量,最終經(jīng)過66 h的發(fā)酵試驗,L-苯丙氨酸的最終產(chǎn)量為41.75 g/L,見圖2,與現(xiàn)有工程菌株34.68 g/L的產(chǎn)量相比有明顯提升。4 討論

【參考文獻】:
期刊論文
[1]易錯PCR研究進展及應(yīng)用[J]. 高義平,趙和,呂孟雨,楊學(xué)舉,王海波.  核農(nóng)學(xué)報. 2013(05)
[2]L-苯丙氨酸生產(chǎn)的代謝工程研究[J]. 賈紅華,韋萍,何冰芳.  生物加工過程. 2004(02)
[3]熒光法測定發(fā)酵液中的苯丙氨酸含量[J]. 范長勝,陳力,余震,鄭善良,楊仁根,周培林.  氨基酸雜志. 1989(02)

博士論文
[1]利用重組大腸桿菌生產(chǎn)L-色氨酸的研究[D]. 古鵬飛.山東大學(xué) 2013
[2]L-苯丙氨酸生產(chǎn)菌株的構(gòu)建、代謝調(diào)控和發(fā)酵條件優(yōu)化[D]. 周海巖.江南大學(xué) 2011



本文編號:3107472

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