病原體的先天免疫應答對宿主實施防御應答很重要。通過模式識別受體（PPRs）識別病原體相關分子模式（PAMPs）,宿主感應病毒和細菌病原體的入侵。干擾素調(diào)節(jié)因子3（IRF3）是針對DNA病毒和RNA病毒感染免疫應答的I型干擾素依賴的關鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。IRF3在非感染細胞中定位于細胞質(zhì)中,病毒感染后轉(zhuǎn)移到細胞核中。病毒感染后,IRF3 C端385位、386位、396位、402位、403位絲氨酸和404位蘇氨酸發(fā)生磷酸化,絲氨酸磷酸化對IRF3激活并調(diào)控IFN-β表達非常重要。通過與其他蛋白發(fā)生相互作用,非受體酪氨酸激酶c-Abl參與調(diào)控骨架重塑、細胞黏附、細胞增殖、氧化和DNA損傷應激、自噬、細胞轉(zhuǎn)化、細胞凋亡以及細胞遷移等,c-Abl也能調(diào)控胸腺細胞的分化,促進脂肪細胞的分化。非受體酪氨酸激酶c-Abl在T細胞發(fā)育和免疫應答中也發(fā)揮重要作用。然而,人們對c-Abl在先天免疫中的功能了解得還不多。本文目的在于研究c-Abl在先天免疫調(diào)控中的作用及機理。實驗室前期研究結果表明,c-Abl可以調(diào)控多個I型干擾素應答基因的表達,提示c-Abl可能與IRF3相互作用并調(diào)節(jié)其活性。用抗c-Abl抗體... 

【文章來源】：軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

導致I型干擾素產(chǎn)生的主要胞內(nèi)通路8細胞質(zhì)dsDNA能直接被IFN調(diào)節(jié)因子的受體DNA依賴的激活子（DAI）

圖 2 c-Abl 的結構示意圖158上圖顯示了全長 c-Abl 的各部分的晶體結構，包括核心部分、F-肌動蛋白結合結構域-FABD、N 端（N-Cap）和 C 端柔性片段。紅色部分顯示核心部分的連接區(qū)域。c-Abl 的特征是含有一個長的 C 端尾巴。遺傳上，該尾巴對 c-Abl 的功能鍵的，c-Abl C 端截斷的純合子小鼠普遍表現(xiàn)出 c-Abl 缺失小鼠的表型缺陷17該區(qū)域包含三個 PxxP 基序，負責與含 SH3 的蛋白質(zhì)相互作用。C 端尾巴也包個核定位信號（NLSs）和一個核輸出信號（NES）基序、一個假定的包含類動性組結構域的 DNA 結合結構域180, 181和一個肌動蛋白結合結構域(FABD)1182。NLS 和 NES 的出現(xiàn)使得 c-Abl 蛋白能基于細胞的需求在兩種細胞組分之梭。在脊椎動物中，c-Abl C 端的 FABD 結構域調(diào)控其與肌動蛋白的結合、集微管交聯(lián)，這對細胞遷移、黏附、內(nèi)吞作用、細胞內(nèi)運輸、自噬等具有重要183

2.1.2 過表達 c-Abl 與 IRF3 相互作用為了進一步證實 c-Abl 與 IRF3 之間的相互作用，本研究首先在 HEK293 細胞中共表達 Flag-IRF3 和 Myc-c-Abl，F(xiàn)lag-IRF3 和 myc-vector 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組作為陰性對照。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后 36~48h 收細胞并用含蛋白酶抑制劑的裂解液裂解細胞25~30min，14000g，4℃離心 15min，留取上清，用抗 Myc 瓊脂糖珠進行免疫共沉淀，并對免疫共沉淀產(chǎn)物進行免疫印跡檢測。結果顯示 Flag-IRF3 與 myc-c-Abl 相互作用，而不與對照 myc-vector 相互作用（圖 4 A）。另外，為了排除標簽對兩個蛋白之間相互作用的影響，我們也用 Flag-c-Abl和 Myc-IRF3 共轉(zhuǎn)染 293T 細胞，用抗 Flag 瓊脂糖珠進行免疫共沉淀反應，并對免疫沉淀產(chǎn)物進行免疫印跡實驗，結果在 anti-Flag 免疫沉淀物中檢測到 Myc-IRF3，在 IgG 免疫共沉淀產(chǎn)物中沒有檢測到 myc-IRF3，這進一步證實了 c-Abl 與 IRF3 相互作用（圖 4 B）。


本文編號：3095695