病原體的先天免疫應(yīng)答對(duì)宿主實(shí)施防御應(yīng)答很重要。通過模式識(shí)別受體（PPRs）識(shí)別病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）,宿主感應(yīng)病毒和細(xì)菌病原體的入侵。干擾素調(diào)節(jié)因子3（IRF3）是針對(duì)DNA病毒和RNA病毒感染免疫應(yīng)答的I型干擾素依賴的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。IRF3在非感染細(xì)胞中定位于細(xì)胞質(zhì)中,病毒感染后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中。病毒感染后,IRF3 C端385位、386位、396位、402位、403位絲氨酸和404位蘇氨酸發(fā)生磷酸化,絲氨酸磷酸化對(duì)IRF3激活并調(diào)控IFN-β表達(dá)非常重要。通過與其他蛋白發(fā)生相互作用,非受體酪氨酸激酶c-Abl參與調(diào)控骨架重塑、細(xì)胞黏附、細(xì)胞增殖、氧化和DNA損傷應(yīng)激、自噬、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞遷移等,c-Abl也能調(diào)控胸腺細(xì)胞的分化,促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化。非受體酪氨酸激酶c-Abl在T細(xì)胞發(fā)育和免疫應(yīng)答中也發(fā)揮重要作用。然而,人們對(duì)c-Abl在先天免疫中的功能了解得還不多。本文目的在于研究c-Abl在先天免疫調(diào)控中的作用及機(jī)理。實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果表明,c-Abl可以調(diào)控多個(gè)I型干擾素應(yīng)答基因的表達(dá),提示c-Abl可能與IRF3相互作用并調(diào)節(jié)其活性。用抗c-Abl抗體... 

【文章來(lái)源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

導(dǎo)致I型干擾素產(chǎn)生的主要胞內(nèi)通路8細(xì)胞質(zhì)dsDNA能直接被IFN調(diào)節(jié)因子的受體DNA依賴的激活子（DAI）

圖 2 c-Abl 的結(jié)構(gòu)示意圖158上圖顯示了全長(zhǎng) c-Abl 的各部分的晶體結(jié)構(gòu)，包括核心部分、F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域-FABD、N 端（N-Cap）和 C 端柔性片段。紅色部分顯示核心部分的連接區(qū)域。c-Abl 的特征是含有一個(gè)長(zhǎng)的 C 端尾巴。遺傳上，該尾巴對(duì) c-Abl 的功能鍵的，c-Abl C 端截?cái)嗟募兒献有∈笃毡楸憩F(xiàn)出 c-Abl 缺失小鼠的表型缺陷17該區(qū)域包含三個(gè) PxxP 基序，負(fù)責(zé)與含 SH3 的蛋白質(zhì)相互作用。C 端尾巴也包個(gè)核定位信號(hào)（NLSs）和一個(gè)核輸出信號(hào)（NES）基序、一個(gè)假定的包含類動(dòng)性組結(jié)構(gòu)域的 DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域180, 181和一個(gè)肌動(dòng)蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域(FABD)1182。NLS 和 NES 的出現(xiàn)使得 c-Abl 蛋白能基于細(xì)胞的需求在兩種細(xì)胞組分之梭。在脊椎動(dòng)物中，c-Abl C 端的 FABD 結(jié)構(gòu)域調(diào)控其與肌動(dòng)蛋白的結(jié)合、集微管交聯(lián)，這對(duì)細(xì)胞遷移、黏附、內(nèi)吞作用、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸、自噬等具有重要183

2.1.2 過表達(dá) c-Abl 與 IRF3 相互作用為了進(jìn)一步證實(shí) c-Abl 與 IRF3 之間的相互作用，本研究首先在 HEK293 細(xì)胞中共表達(dá) Flag-IRF3 和 Myc-c-Abl，F(xiàn)lag-IRF3 和 myc-vector 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組作為陰性對(duì)照。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后 36~48h 收細(xì)胞并用含蛋白酶抑制劑的裂解液裂解細(xì)胞25~30min，14000g，4℃離心 15min，留取上清，用抗 Myc 瓊脂糖珠進(jìn)行免疫共沉淀，并對(duì)免疫共沉淀產(chǎn)物進(jìn)行免疫印跡檢測(cè)。結(jié)果顯示 Flag-IRF3 與 myc-c-Abl 相互作用，而不與對(duì)照 myc-vector 相互作用（圖 4 A）。另外，為了排除標(biāo)簽對(duì)兩個(gè)蛋白之間相互作用的影響，我們也用 Flag-c-Abl和 Myc-IRF3 共轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞，用抗 Flag 瓊脂糖珠進(jìn)行免疫共沉淀反應(yīng)，并對(duì)免疫沉淀產(chǎn)物進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)，結(jié)果在 anti-Flag 免疫沉淀物中檢測(cè)到 Myc-IRF3，在 IgG 免疫共沉淀產(chǎn)物中沒有檢測(cè)到 myc-IRF3，這進(jìn)一步證實(shí)了 c-Abl 與 IRF3 相互作用（圖 4 B）。


本文編號(hào)：3095695