形態(tài)學分析對理解腦的結(jié)構(gòu)與功能十分必要,它可以反映腦功能相關(guān)的神經(jīng)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。高爾基染色法作為一種經(jīng)典的形態(tài)染色方法,廣泛應(yīng)用于神經(jīng)元形態(tài)學的研究中。特別是在靈長類腦組織的研究中,其他標記手段尚未成功應(yīng)用的情況下,高爾基染色法仍是靈長類腦組織神經(jīng)元形態(tài)研究中不可或缺的重要標記方法。然而,由于缺乏合適的細胞構(gòu)筑復(fù)染及成像方法,高爾基染色法雖然能獲取單個神經(jīng)元的樹突形態(tài),但難以獲取共定位的準確位置信息,限制了其在神經(jīng)元形態(tài)精確分析中的應(yīng)用。因此,發(fā)展一種快速高通量地同時獲取全腦高爾基染色神經(jīng)元形態(tài)及其共定位解剖參考信息的成像方法,是亟待解決的技術(shù)難題。針對這一需求,本文對紅色熒光核酸染料復(fù)染厚組織中高爾基染色神經(jīng)元的可行性進行了研究,通過與熒光蛋白標記神經(jīng)元的復(fù)染效果進行對比,證實了紅色熒光核酸染料可用于為高爾基染色樣本提供共定位的細胞構(gòu)筑信息。進一步地,研究了紅色熒光核酸染料在高爾基染色樣本中的滲透規(guī)律,以及復(fù)染效果對軸向成像深度的影響,實現(xiàn)了高對比度、高效率、單細胞分辨的解剖定位信息的復(fù)染和獲取。在此基礎(chǔ)上,本文發(fā)展了一種雙模式顯微光學切片斷層成像方法并成功構(gòu)建了成像系統(tǒng),利用三窗口二色... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

間隔片染方法提供定位信息Figure1-1Sampledstainingmethodprovidespositioninformation

華 中 科 技 大 學 博 士 學 位 論 文尼氏染色的腦片結(jié)果無法與之前的高爾基染色結(jié)果直接對應(yīng)匹配。也就是說，這種方法其實是通過犧牲神經(jīng)元形態(tài)信息的元提供解剖參考信息，這不利于后續(xù)的神經(jīng)元形態(tài)分析。定位信息提供方法泛使用的尼氏染料焦油紫（Cresylviolet），它在復(fù)染高爾基染高爾基染色導致的腦片 pH 值的變化會影響后續(xù)的焦油紫復(fù)染基染色過程中的腦片 pH 值，一種利用焦油紫復(fù)染高爾基染色 = 7.6 的高爾基染色腦片不進行脫水，而是直接在焦油紫染液，成功地在小鼠的小腦部位厚度為 50 μm 的腦片上同時展示形態(tài)信息以及尼氏染色的細胞構(gòu)筑信息，如圖 1-2 所示。

華 中 科 技 大 學 博 士 學 位 論 文icro-opticalsectioningtomography，MOST）[84]方法通過使用高色后腦片的“載玻片”，結(jié)合高精度的三維平移臺，利用邊切對完整鼠腦樣本的全腦高爾基染色信號或尼氏染色信號的獲金剛石刀作為反射襯底，照明光經(jīng)過染色腦片后照射在金剛回來，再經(jīng)過顯微成像系統(tǒng)被聚焦成像。與透射式成像方式類了照明光從而表現(xiàn)為黑色，而照明光會透過未被染色的組織而使被染色組織從背景中顯現(xiàn)出來，如圖 1-3 所示。但是，這率由切片的厚度決定，當繼續(xù)增加樣本的切削厚度時，焦面上號的干擾。


本文編號：3039560