誤食野生蘑菇中毒事件近年來在我國頻頻發(fā)生,已成為我國食物中毒事件中導(dǎo)致死亡的最主要因素,并且80%以上的蘑菇中毒死亡都是由劇毒的鵝膏菌所引起。中毒后蘑菇種類的早期鑒定對于中毒診斷和治療具有非常重要的作用,然而,由于鵝膏菌物種的多樣性以及往往中毒現(xiàn)場樣本的不完整性,形態(tài)鑒定又需要專業(yè)分類工作者,同時,目前的分子生物學(xué)鑒定需要PCR儀和DNA測序,所需時間長,難以滿足基層疾控和醫(yī)療單位對毒蘑菇中毒后需要快速鑒定毒源的要求。此外,目前劇毒鵝膏等含鵝膏毒素物種的轉(zhuǎn)錄組信息數(shù)據(jù)不足,相關(guān)毒素基因家族研究也正成為研究熱點,還有更多新的環(huán)肽基因及其編碼的肽類物質(zhì)有待發(fā)現(xiàn)。本文從劇毒鵝膏等溫擴增檢測方法的建立、劇毒鵝膏等子實體的de novo轉(zhuǎn)錄組測序、鵝膏毒素基因及脯氨酰寡肽酶基因（POP）的多樣性等方面展開了研究,主要結(jié)果如下:1.基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）,以內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）作為靶序列,針對歐美的雙孢鵝膏Amanita bisporigera、綠蓋鵝膏A.phalloides以及我國的致命鵝膏A.exit... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：138 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

α-AMA和PHA基因的cDNA和氨基酸序列的比對[61]

圖1-3鵝膏環(huán)肽的生物合成Figure 1-3 Biosynthesis of Amanita cyclopeptides.1.4. 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)的研究進展環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是一種新型的核酸分子擴增技術(shù)，在 2000 年由 Notomi 等日本科學(xué)家發(fā)明，該技術(shù)基于靶基因的 6 個不同區(qū)域設(shè)計 4 條引物，利用鏈置換型 Bst DNA 聚合酶在恒溫條件（65 °C 左右）進行擴增反應(yīng)，1 小時內(nèi)即可實現(xiàn) 109-1010倍的核酸擴增[74]。1.4.1 LAMP 反應(yīng)的原理

博士學(xué)位論文16圖1-4 LAMP反應(yīng)示意圖Figture 1-4 Schematic representation of the LAMP reaction.A. 引物及結(jié)合位點；B. 啞鈴結(jié)構(gòu)形成階段；C. 循環(huán)擴增階段1.4.2 LAMP 的特點第一、特異性強。LAMP 反應(yīng)需要四條特異性引物，分別對應(yīng)靶基因上 6

【參考文獻】：
期刊論文
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