玉簪（Hosta）是百合科玉簪屬多年生的草本花卉,作為園林觀賞植物和藥用植物,應(yīng)用極其普遍,過去玉簪多種植在我國江南地區(qū),后被廣泛引種栽培,現(xiàn)在在我國北方地區(qū),玉簪已發(fā)展成為重要的耐陰露地花葉共賞型花卉。然而玉簪雖然栽培品種眾多,但花色卻很單一,只有白色和紫色兩種花色,因此挖掘玉簪花色代謝基因,培育玉簪新花色品種尤為重要。形成植物花色的主要色素有甜菜堿、類胡蘿卜色素、類黃酮,其中類黃酮是最廣泛存在于植物中的色素。查爾酮合成酶是類黃酮生物合成途徑中的關(guān)鍵酶,大量研究表明查爾酮合成酶及花青素合成酶對植物花色的形成起著至關(guān)重要的作用。本研究以紫萼玉簪（Hosta ventricosa）為材料,采用RT-PCR方法,克隆了紫萼玉簪CHS和ANS基因全長cDNA序列,命名為HVCHS和HVANS,大小分別為1176bp和1059bp,編碼391和352個氨基酸,采用生物信息學(xué)方法預(yù)測HVCHS和HVANS基因的結(jié)構(gòu)和功能,構(gòu)建植物過表達(dá)載體pCAMBIA3301-HVCHS和pCAMBIA3301-HVANS,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將HVCHS和HVANS基因轉(zhuǎn)化到煙草中,通過對轉(zhuǎn)基因煙草植株的分子... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

花青素生物合成途徑[31]

PCR 擴增 HVCHS 和 HVANS 基因的編碼區(qū)序列（見圖 2.1-B 和 2.2-A），在 1176bp 左右和1059bp 處可見明亮的單一條帶�；厥�、純化的目的基因與克隆載體 pMD-18T 連接，PCR初步驗證克隆載體pMD-18T-HVCHS和pMD-18T-HVANS構(gòu)建成功（見圖2.1-C和2.2-B），陽性克隆載體質(zhì)粒測序結(jié)果表明，克隆得到的 HVCHS 基因序列與玉簪轉(zhuǎn)錄組庫中的 CHS基因的 CDS 序列（第 30bp~1205bp）同源性為 100%（見圖 2.3），克隆得到的 HVANS 基因序列與玉簪轉(zhuǎn)錄組庫中 ANS 基因序列（第 7bp-1065bp）同源性為 100%（見圖 2.4），證明成功克隆了紫萼玉簪 HVCHS 基因和 HVANS 基因的編碼區(qū)序列。

A：RNARNA ；A: RNAbuddinamp電泳檢測圖，B：PCR 擴pMD-18Telectrophoresng, early flowplification HVpMD，1~5：分別擴增 HVCHST-HVCHS 的Fig.2.1sis detection,wering, fμLl flVCHS gene, M18T-HVCHS圖 2.1 紫萼別為綠苞期、基因電泳圖PCR 鑒定，Cloning of H1~5: Total Rlowering stagM: DNA MarS , M: DNA M萼玉簪 HVCH紫綠間苞期，M：DNAM：DNA MHVCHS geneRNA from thegs of hosta verker DL 2000Marker DL 20HS 基因的克、紫苞期、初Marker DL 2Marker DL 200from Hosta Vgreen budingentricosa; B: E0, 1~4: HVCH000, 1~6: Rec克隆初花期、盛花2000，1~4：00，1~6：重Ventricosag, green and pElectrophoreHS gene；C:combinant pla花期的紫萼玉HVCHS 基因重組質(zhì)粒；purple buddinsis detectionPCR detectioasmid.玉簪花瓣總因；C：ng, purpleof PCRon of


本文編號：2960013