玉簪（Hosta）是百合科玉簪屬多年生的草本花卉,作為園林觀賞植物和藥用植物,應(yīng)用極其普遍,過去玉簪多種植在我國江南地區(qū),后被廣泛引種栽培,現(xiàn)在在我國北方地區(qū),玉簪已發(fā)展成為重要的耐陰露地花葉共賞型花卉。然而玉簪雖然栽培品種眾多,但花色卻很單一,只有白色和紫色兩種花色,因此挖掘玉簪花色代謝基因,培育玉簪新花色品種尤為重要。形成植物花色的主要色素有甜菜堿、類胡蘿卜色素、類黃酮,其中類黃酮是最廣泛存在于植物中的色素。查爾酮合成酶是類黃酮生物合成途徑中的關(guān)鍵酶,大量研究表明查爾酮合成酶及花青素合成酶對(duì)植物花色的形成起著至關(guān)重要的作用。本研究以紫萼玉簪（Hosta ventricosa）為材料,采用RT-PCR方法,克隆了紫萼玉簪CHS和ANS基因全長(zhǎng)cDNA序列,命名為HVCHS和HVANS,大小分別為1176bp和1059bp,編碼391和352個(gè)氨基酸,采用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)HVCHS和HVANS基因的結(jié)構(gòu)和功能,構(gòu)建植物過表達(dá)載體pCAMBIA3301-HVCHS和pCAMBIA3301-HVANS,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將HVCHS和HVANS基因轉(zhuǎn)化到煙草中,通過對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草植株的分子... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

花青素生物合成途徑[31]

PCR 擴(kuò)增 HVCHS 和 HVANS 基因的編碼區(qū)序列（見圖 2.1-B 和 2.2-A），在 1176bp 左右和1059bp 處可見明亮的單一條帶。回收、純化的目的基因與克隆載體 pMD-18T 連接，PCR初步驗(yàn)證克隆載體pMD-18T-HVCHS和pMD-18T-HVANS構(gòu)建成功（見圖2.1-C和2.2-B），陽性克隆載體質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果表明，克隆得到的 HVCHS 基因序列與玉簪轉(zhuǎn)錄組庫中的 CHS基因的 CDS 序列（第 30bp~1205bp）同源性為 100%（見圖 2.3），克隆得到的 HVANS 基因序列與玉簪轉(zhuǎn)錄組庫中 ANS 基因序列（第 7bp-1065bp）同源性為 100%（見圖 2.4），證明成功克隆了紫萼玉簪 HVCHS 基因和 HVANS 基因的編碼區(qū)序列。

A：RNARNA ；A: RNAbuddinamp電泳檢測(cè)圖，B：PCR 擴(kuò)pMD-18Telectrophoresng, early flowplification HVpMD，1~5：分別擴(kuò)增 HVCHST-HVCHS 的Fig.2.1sis detection,wering, fμLl flVCHS gene, M18T-HVCHS圖 2.1 紫萼別為綠苞期、基因電泳圖PCR 鑒定，Cloning of H1~5: Total Rlowering stagM: DNA MarS , M: DNA M萼玉簪 HVCH紫綠間苞期，M：DNAM：DNA MHVCHS geneRNA from thegs of hosta verker DL 2000Marker DL 20HS 基因的克、紫苞期、初Marker DL 2Marker DL 200from Hosta Vgreen budingentricosa; B: E0, 1~4: HVCH000, 1~6: Rec克隆初花期、盛花2000，1~4：00，1~6：重Ventricosag, green and pElectrophoreHS gene；C:combinant pla花期的紫萼玉HVCHS 基因重組質(zhì)粒；purple buddinsis detectionPCR detectioasmid.玉簪花瓣總因；C：ng, purpleof PCRon of


本文編號(hào)：2960013