桂花（Osmanthus fragrans Lour）又名木犀、巖桂和九里香,是木犀科木犀屬植物,原產(chǎn)我國,是特有的常綠闊葉灌木或小喬木經(jīng)濟樹種,具有2500多年的栽培歷史,是我國十大傳統(tǒng)名花之一。桂花因具有豐富的顏色和獨特的芳香,從古至今備受人們喜愛,而且在觀賞、食品、藥用和香料等方面具有廣泛的應用價值。根據(jù)開花時期、花色花香等特征,桂花可以分為銀桂品種群、四季桂品種群、金桂品種群、丹桂品種群和彩葉桂品種群。研究發(fā)現(xiàn),桂花花瓣的顏色是由類胡蘿卜素含量決定的,花瓣中類胡蘿卜素的含量越高,花瓣的顏色越深。桂花花瓣類胡蘿卜素裂解雙加氧酶（carotenoid cleavage dioxygenase,CCD）CCD1和CCD4可以裂解類胡蘿卜素產(chǎn)生芳香物質(zhì)紫羅蘭酮（包括α-紫羅蘭酮和β-紫羅蘭酮）,使桂花具有獨特的香味。因此,CCD1和CCD4是桂花類胡蘿卜素裂解和紫羅蘭酮產(chǎn)生的關(guān)鍵基因。本研究利用分子生物學方法研究桂花ERF2轉(zhuǎn)錄因子對桂花CCD1和CCD4基因表達的調(diào)控,主要研究結(jié)果如下:（1）桂花ERF2基因克隆及CCD1、CCD4和ERF2基因的表達模式分析設計特異性引物擴增ERF... 

【文章來源】：河南大學河南省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 桂花的研究背景
    1.2 桂花花色與花香研究進展
    1.3 類胡蘿卜素裂解雙加氧酶CCD基因研究進展
    1.4 轉(zhuǎn)錄因子的簡介及相關(guān)研究技術(shù)
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄因子簡介
        1.4.2 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子簡介
        1.4.3 ERF轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)
        1.4.4 ERF轉(zhuǎn)錄因子作用機制
        1.4.5 ERF轉(zhuǎn)錄因子的功能
    1.5 煙草瞬時轉(zhuǎn)化技術(shù)
    1.6 EMSA技術(shù)
    1.7 本研究的目的與意義
第二章 桂花ERF2 基因的克隆及ERF2與CCD1和CCD4 基因的表達模式分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實驗儀器與試劑
        2.1.3 實驗所需引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 桂花花瓣RNA的提取
        2.2.2 RNA瓊脂糖凝膠電泳檢測
        2.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 桂花ERF2 基因的擴增
        2.2.5 目的片段的回收純化
        2.2.6 桂花ERF2 基因與CCD1和CCD4 基因表達模式分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 ERF2 轉(zhuǎn)錄因子的序列分析
        2.3.2 不同花期銀桂和丹桂花瓣CCD1、CCD4和ERF2 基因表達量分析
    2.4 討論
第三章 Of ERF2 轉(zhuǎn)錄因子亞細胞定位
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 質(zhì)粒載體與菌株
        3.1.3 實驗儀器與藥品試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 目的片段的擴增與回收
        3.2.2 35 S::OfERF2 超表達載體的構(gòu)建
        3.2.3 35 S::OfERF2 超表達重組載體的檢測、提取
        3.2.4 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的制備與轉(zhuǎn)化
        3.2.5 煙草轉(zhuǎn)化與亞細胞定位分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 35 S::OfERF2 重組載體的構(gòu)建
        3.3.2 轉(zhuǎn)化煙草的亞細胞定位分析
    3.4 討論
第四章 桂花ERF2 基因在煙草葉片中超表達分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 質(zhì)粒載體和菌株
        4.1.3 實驗儀器與試劑藥品
    4.2 實驗方法
        4.2.1 目的基因的獲得
        4.2.2 35 S::OfERF2 超表達重組載體的構(gòu)建
        4.2.3 35 S::OfERF2 超表達重組載體的檢測和提取
        4.2.4 制備農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞與轉(zhuǎn)化
        4.2.5 煙草葉片的轉(zhuǎn)化
        4.2.6 煙草葉片的超表達檢測
    4.3 結(jié)果分析
    4.4 討論
第五章 桂花ERF2 轉(zhuǎn)錄因子與CCD1和CCD4 基因啟動子相互作用分析
    5.1 實驗材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 質(zhì)粒載體與菌株
        5.1.3 實驗試劑與儀器
        5.1.4 實驗所用引物序列
    5.2 實驗方法
        5.2.1 桂花花瓣DNA的提取
        5.2.2 目的基因的擴增、純化和酶切
        5.2.3 CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        5.2.4 CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS靶質(zhì)粒的鑒定與提取
        5.2.5 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的制備與轉(zhuǎn)化
        5.2.6 35 S::OfERF2 超表達載體與CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS靶質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化
        5.2.7 煙草GUS染色
        5.2.8 共轉(zhuǎn)化煙草葉片中GUS基因表達量檢測
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS重組載體的構(gòu)建
        5.3.2 35 S::OfERF2 超表達載體與CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS靶質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化以及GUS染色
        5.3.3 共轉(zhuǎn)化煙草葉片中GUS基因表達量的檢測
    5.4 討論
第六章 Of ERF2 蛋白與CCD1和CCD4 基因啟動子上相關(guān)元件的相互作用
    6.1 實驗材料
        6.1.1 質(zhì)粒載體與菌株
        6.1.2 實驗儀器與試劑
        6.1.3 溶液配制
    6.2 實驗方法
        6.2.1 ERF2 基因的擴增與純化
        6.2.2 載體和目的片段酶切與連接
        6.2.3 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與檢測
        6.2.4 誘導目的蛋白的表達與檢測
        6.2.5 目的蛋白的純化
        6.2.6 EMSA 實驗
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 目的蛋白的誘導表達與純化
        6.3.2 EMSA 驗證實驗
    6.4 討論
第七章 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]農(nóng)桿菌滲入法介導的基因瞬時表達技術(shù)及應用[J]. 邱礽,陶剛,李奇科,邱又彬,劉作易.  分子植物育種. 2009(05)
[2]ERF類轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 葛寶宇,林軼,侯和勝.  安徽農(nóng)學通報. 2007(20)
[3]中國桂花的研究歷史、現(xiàn)狀與桂花品種國際登錄[J]. 臧德奎,向其柏,劉玉蓮,郝日明.  植物資源與環(huán)境學報. 2003(04)
[4]南京地區(qū)桂花栽培品種調(diào)查研究[J]. 劉玉蓮.  南京林業(yè)大學學報(自然科學版). 1985(01)



本文編號：2954922