乳酸桿菌的蛋白水解系統(tǒng)包括細(xì)胞胞壁蛋白酶（cell-envelope proteinase,CEP）,寡肽轉(zhuǎn)運系統(tǒng)和內(nèi)肽酶。其中,CEP作為該系統(tǒng)的關(guān)鍵酶發(fā)揮著重要作用,不僅參與酪蛋白降解,助發(fā)酵產(chǎn)品風(fēng)味和質(zhì)地的形成,還可酶解食物蛋白釋放出生物活性肽,有益于消費者健康。目前關(guān)于乳桿菌CEP分離純化的報道不多,對其結(jié)構(gòu)鑒定更是鮮有報道,本課題采用不同提取方法研究4種乳桿菌CEP的提取效果;探討雙水相系統(tǒng)對CEP分離的影響,單因素及響應(yīng)面法優(yōu)化確定雙水相分離CEP最佳條件;采用超濾、葡聚糖凝膠色譜對其分離純化;電泳測酶分子量,基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜法（MALDI-TOF-MS）鑒定CEP,比較不同乳桿菌的產(chǎn)酶差異。研究結(jié)論如下:1.選取的10種方法提取4株乳桿菌CEP存在顯著差異。Ca²⁺-free法為植物乳桿菌LP69和鼠李糖乳桿菌LR22 CEPs的最適提取方法;保加利亞乳桿菌LB6和干酪乳桿菌L61 CEPs的最適提取劑分別是鹽酸胍和十二烷基硫酸鈉（SDS）。綜合考慮提取方法對四株菌的通用性及效果,選用Ca²⁺-free法處理4種... 

【文章來源】：陜西科技大學(xué)陜西省

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

乳酸桿菌蛋白水解體系的簡化結(jié)構(gòu)示意圖

圖 3-1 酪氨酸及蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 3-1 The standard curve of tyrosine and bovine serum albumin酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為 y=0.01x+0.0012，R2=0.9996；蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為 y=0.0076x+0.0085，R2=0.9991，表明酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線及蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線中的濃度與吸光度間有良好的線性關(guān)系。3.2 探究提取方法對乳桿菌胞壁蛋白酶的影響3.2.1 不同提取劑最適濃度的確定將四種益生乳桿菌 LP69、LR22、LB6 和 L61 菌體分別懸浮于表 2-3 所述的條件下培養(yǎng)，在 4℃下 4500r/min 離心 20min 后取上清液即為 CEP 粗酶液。通過一系列濃度梯度試驗，測定粗酶液的酶活、蛋白含量及比活力，最終確定十種提取劑提取四種乳桿菌CEP 的最適濃度，結(jié)果見表 3-1。表 3-1 使用不同提取劑提取四種乳桿菌 CEP 的最適濃度Tab. 3-1 The optimal concentration of CEP obtained from different extraction agents提取方法四種乳桿菌 CEP 的最適濃度

-4 分別為 Sephadex G-100 純化后 LP69 CEP、LR22 CE圖 3-17 乳桿菌 CEP 的 SDS-PAGE 電泳圖-17 SDS-PAGE electrophoretograms of CEP from Lactob看出，經(jīng)雙水相萃取、超濾、Sephadex G-100 凝泳道上只出現(xiàn)了一條清晰的條帶，對比標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量大約為45K Da，鼠李糖乳桿菌 LR22 CEP6 CEP 分子量約為30K Da，干酪乳桿菌 L61 CEP酸菌 CEP 分子量大小受菌株的影響。童敏[73]中提取 CEP，并對其粗酶液進行硫酸銨分級沉hadex G-100 凝膠層析后，得到了純的 CEP。電驗得到干酪乳桿菌 L61 分子量相近。PalenciaP 分子量約為 153K Da。同一乳桿菌不同菌株其球菌 LB12 中提取的 CEP 經(jīng)分離純化后其分人[20]從瑞士乳桿菌L89中提取的CEP分子量約

【參考文獻】：
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