目的:在細胞自噬發(fā)生過程時,蛋白質乙酰化修飾參與并調控相關自噬通路。但迄今為止,自噬與蛋白乙酰化組學的關系尚未闡明。為此,我們將探究雷帕霉素誘導細胞自噬發(fā)生的過程中,蛋白質乙酰化組學的特征及其乙�；稽c在自噬過程中的修飾特征。方法:首先主要采用SILAC標記技術、乙酰化賴氨酸抗體富集并行串聯(lián)質譜技術,對細胞自噬過程中整體蛋白表達水平和乙�；竭M行高通量檢測,然后通過相關生物信息學技術對質譜檢測結果進行蛋白質乙酰化組學總體特征的全面分析。之后再通過位點定點突變技術、基因轉染技術驗證乙�；竝300的乙�；揎椢稽c對細胞自噬的影響。結果:（1）我們共檢測到1081個蛋白、2135個乙酰化位點,其中421個位點在細胞自噬過程中存在明顯的乙�；降淖兓�80.8%的乙�；稽c顯著下調,19.2%的乙酰化位點顯著上調。（2）乙�；稽c相關基序（MOTIF）分析表明,存在5個與自噬相關的乙�；�,分別為[G-K-AcK],[A-X-AcK],[G-AcK],[K-AcK]和[AcK-K]。所有下調的位點的乙�；嚓P基序富集為[G-AcK],這些位點點可能是受乙酰化酶p300調控的。（3）乙酰... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．免疫印跡分析在加或不加ｌ〇〇ｎＭＢａｆ－Ａｌ的情況下用０．１?雷帕霉素處理不同時間??－

理１２?ｈ。細胞處理完成后，實驗組與對照組中分別取等量的細胞混合并用胰蛋白??酶消化，乙酰化的肽段通過抗乙�；嚢彼岬目贵w親和富集，之后串聯(lián)質譜的結??果通過ＭａｘＱｕａｎｔ軟件的Ａｎｄｒｏｍｅｄａ搜索引擎［１５］進行搜索（圖２）。??０．１?ｐＭ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｒａｐａｍｙｃｉｎ??，３Ｃ＃?Ｌｙｓｉｎｅ?Ｌｙｓｉｎｅ??－Ｈｅａｖｙ＂?－Ｌｉｇｈｔ＂??Ｍｉｘ?１１：１??Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ??１??Ｔｒｙｐｓｉｎ?Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ｏｆ??ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ?ｐｅｐｔｉｄｅｓ?％??Ｉ?＼??ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ＭＳ／ＭＳ?ａｎａｌｙｓｉｓ??Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ?Ａｎａｌｙｓｉｓ??圖２．雷帕霉素誘導的自噬定量乙�；V的實驗策略??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｓｔｒａｔｅｇｙ?ｆｏｒ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ａｃｅｔｙｌｏｍｅ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｕｐｏｎ??ｒａｐａｍｙｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ．??同時，為了獲得更為可靠的數據，我們進行了三次生物學重復。結果表明，??三次生物學重復Ｐｅａｒｓｏｎ相關系數處于０．８２？０．８３，表明該技術的重復性（圖３）。??所有的蛋白、肽段以及修飾位點均經過ＦＤＲ校正（ＦＤＲ＜０．０１）。同時

ｒａｐａｍｙｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ．??同時，為了獲得更為可靠的數據，我們進行了三次生物學重復。結果表明，??三次生物學重復Ｐｅａｒｓｏｎ相關系數處于０．８２？０．８３，表明該技術的重復性（圖３）。??所有的蛋白、肽段以及修飾位點均經過ＦＤＲ校正（ＦＤＲ＜０．０１）。同時，我們計算??１５??


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