目的:在細(xì)胞自噬發(fā)生過程時,蛋白質(zhì)乙�；揎梾⑴c并調(diào)控相關(guān)自噬通路。但迄今為止,自噬與蛋白乙酰化組學(xué)的關(guān)系尚未闡明。為此,我們將探究雷帕霉素誘導(dǎo)細(xì)胞自噬發(fā)生的過程中,蛋白質(zhì)乙�；M學(xué)的特征及其乙�；稽c在自噬過程中的修飾特征。方法:首先主要采用SILAC標(biāo)記技術(shù)、乙�；嚢彼峥贵w富集并行串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),對細(xì)胞自噬過程中整體蛋白表達(dá)水平和乙酰化水平進(jìn)行高通量檢測,然后通過相關(guān)生物信息學(xué)技術(shù)對質(zhì)譜檢測結(jié)果進(jìn)行蛋白質(zhì)乙�；M學(xué)總體特征的全面分析。之后再通過位點定點突變技術(shù)、基因轉(zhuǎn)染技術(shù)驗證乙�；竝300的乙�；揎椢稽c對細(xì)胞自噬的影響。結(jié)果:（1）我們共檢測到1081個蛋白、2135個乙�；稽c,其中421個位點在細(xì)胞自噬過程中存在明顯的乙�；降淖兓�80.8%的乙�；稽c顯著下調(diào),19.2%的乙�；稽c顯著上調(diào)。（2）乙�；稽c相關(guān)基序（MOTIF）分析表明,存在5個與自噬相關(guān)的乙�；�,分別為[G-K-AcK],[A-X-AcK],[G-AcK],[K-AcK]和[AcK-K]。所有下調(diào)的位點的乙�；嚓P(guān)基序富集為[G-AcK],這些位點點可能是受乙酰化酶p300調(diào)控的。（3）乙酰... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．免疫印跡分析在加或不加ｌ〇〇ｎＭＢａｆ－Ａｌ的情況下用０．１?雷帕霉素處理不同時間??－

理１２?ｈ。細(xì)胞處理完成后，實驗組與對照組中分別取等量的細(xì)胞混合并用胰蛋白??酶消化，乙酰化的肽段通過抗乙�；嚢彼岬目贵w親和富集，之后串聯(lián)質(zhì)譜的結(jié)??果通過ＭａｘＱｕａｎｔ軟件的Ａｎｄｒｏｍｅｄａ搜索引擎［１５］進(jìn)行搜索（圖２）。??０．１?ｐＭ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｒａｐａｍｙｃｉｎ??，３Ｃ＃?Ｌｙｓｉｎｅ?Ｌｙｓｉｎｅ??－Ｈｅａｖｙ＂?－Ｌｉｇｈｔ＂??Ｍｉｘ?１１：１??Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ??１??Ｔｒｙｐｓｉｎ?Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ｏｆ??ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ?ｐｅｐｔｉｄｅｓ?％??Ｉ?＼??ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ＭＳ／ＭＳ?ａｎａｌｙｓｉｓ??Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ?Ａｎａｌｙｓｉｓ??圖２．雷帕霉素誘導(dǎo)的自噬定量乙�；V的實驗策略??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｓｔｒａｔｅｇｙ?ｆｏｒ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ａｃｅｔｙｌｏｍｅ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｕｐｏｎ??ｒａｐａｍｙｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ．??同時，為了獲得更為可靠的數(shù)據(jù)，我們進(jìn)行了三次生物學(xué)重復(fù)。結(jié)果表明，??三次生物學(xué)重復(fù)Ｐｅａｒｓｏｎ相關(guān)系數(shù)處于０．８２？０．８３，表明該技術(shù)的重復(fù)性（圖３）。??所有的蛋白、肽段以及修飾位點均經(jīng)過ＦＤＲ校正（ＦＤＲ＜０．０１）。同時

ｒａｐａｍｙｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ．??同時，為了獲得更為可靠的數(shù)據(jù)，我們進(jìn)行了三次生物學(xué)重復(fù)。結(jié)果表明，??三次生物學(xué)重復(fù)Ｐｅａｒｓｏｎ相關(guān)系數(shù)處于０．８２？０．８３，表明該技術(shù)的重復(fù)性（圖３）。??所有的蛋白、肽段以及修飾位點均經(jīng)過ＦＤＲ校正（ＦＤＲ＜０．０１）。同時，我們計算??１５??


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