發(fā)布時(shí)間：2020-12-20 11:04

　　AP2a（AP2α）是哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,它能參與生物體細(xì)胞內(nèi)多種生理生化活動(dòng)。本課題前期的研究表明,FLNA能夠抑制RNA聚合酶Ⅲ所指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄及其轉(zhuǎn)錄因子BRF1和TFⅢC2的表達(dá);通過mRNA-seq分析發(fā)現(xiàn),在SaOS2 FLNA敲低細(xì)胞中也明顯增加AP2a mRNA的表達(dá)。通過檢測AP2a的mRNA和蛋白水平,我們發(fā)現(xiàn)FLNA敲低的兩組系（HeLa和SaOS2）確實(shí)能增加AP2a的表達(dá)。由于FLNA能同時(shí)抑制AP2a,BRF1,TFⅢC2及RNA聚合酶Ⅲ（Pol Ⅲ）基因的表達(dá),AP2a是否也介導(dǎo)RNA聚合酶Ⅲ及其轉(zhuǎn)錄因子TFⅢC2和BRF1的基因轉(zhuǎn)錄并不清楚。因此,本研究以AP2a作為研究對象,探究其在Pol Ⅲ指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄中的作用及其機(jī)制。為了完成以上研究目標(biāo),我們建立了293T和Hela細(xì)胞AP2a shRNA穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系并利用這些細(xì)胞系研究AP2a對Pol Ⅲ及其轉(zhuǎn)錄因子BRF1和TFⅢC2表達(dá)的影響。結(jié)果表明,AP2a敲低能夠顯著降低Pol Ⅲ、BRF1和TFⅢC2基因表達(dá)水平,提示AP2a是Pol Ⅲ指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄所必需的。為了進(jìn)一步確定這一發(fā)... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

SaOS2FLNA敲低細(xì)胞系和對照細(xì)胞系mRNA-seq分析證明FLNA敲低增強(qiáng)AP2amRNA的表達(dá)

圖 3.2 FLNA 敲低對細(xì)胞系中 AP2a 表達(dá)的影響rl shRNA 或 FLNA shRNA 的 HeLa（A 和 B）、Saos2（C 和 D）a 的表達(dá)水平的變化。表達(dá)抑制 AP2a 的表達(dá)

3.3 FLNA 過表達(dá)對 HeLa 細(xì)胞系中 AP2a 表達(dá)的影響 過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系中，用 RT-qPCR 和 Western blot 檢測A over 表示 FLNA 過表達(dá))。和 Ctrl 中 AP2a mRNA 的表達(dá)。和 Ctrl 中 AP2a 蛋白的表達(dá)。敲低顯著抑制 Pol III、BRF1 和 TFIII FLNA 敲低增加 Pol III 基因轉(zhuǎn)錄以及 BRF1， T BRF1 和 TFIIIC2 啟動(dòng)子序列，兩者都含有 AP2此我們推測，AP2a 可能參與 PoI III 基因表達(dá)或。為了證明這一假設(shè)，我們首先將構(gòu)建好的 APontrol shRNA 表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞。36 Western blot 檢測 Pol III、BRF1 和 TFIIIC2 基因表

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組蛋白甲基化促進(jìn)AP2a基因表達(dá)及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化[J]. 馬平,杜娟,范志朋.  北京口腔醫(yī)學(xué). 2013(06)

碩士論文
[1]細(xì)絲蛋白A介導(dǎo)的RNA聚合酶Ⅲ基因轉(zhuǎn)錄機(jī)制的研究[D]. 周穎.武漢科技大學(xué) 2018



本文編號：2927756