米象是一種重要的貯藏害蟲,對世界糧食產(chǎn)量產(chǎn)生威脅,由于熏蒸劑磷化鋁的使用,米象產(chǎn)生了一定的PH₃抗性。本文通過轉(zhuǎn)錄組技術(shù),分析了米象幾種代謝解毒相關(guān)基因谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶,細胞色素P450和酯酶的表達;獲得了米象基因遺傳信息。目前,隨著生物技術(shù)的進步,尤其是基因組學(xué)的廣泛應(yīng)用,可以在轉(zhuǎn)錄組水平研究米象基因的表達情況,進而從本質(zhì)上全面揭示米象的磷化氫抗性。采用Illumina測序技術(shù),米象敏感品系轉(zhuǎn)錄組測序共獲得reads是22,128,957和6,562,957,738個核苷酸,PH₃熏蒸品系轉(zhuǎn)錄組測序共獲得reads是27,306,829和8,093,178,954個核苷酸。將轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)通過組裝,將這些transcripts拼接成為42,173個unigenes。將得到Unigene提交蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（Nr）進行比對,共有16,610個返回有效結(jié)果。同時還將Unigene提交至其它數(shù)據(jù)庫進行注釋,共有17,335個Unigene得到成功注釋。44.45%的Unigene與中歐山松大小蠹的相關(guān)基因同源性最高。26.96%的Unigene與赤擬谷盜... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
1 前言
    1.1 米象抗藥性研究現(xiàn)狀
    1.2 昆蟲代謝解毒酶的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的研究進展
        1.2.2 細胞色素P450 家族的研究現(xiàn)狀
        1.2.3 酯酶的研究進展
    1.3 昆蟲轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究進展
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄組測序發(fā)現(xiàn)功能基因
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄組測序研究基因差異表達
        1.3.3 Gene ontology（基因本體論）
        1.3.4 COG分析
        1.3.5 KEGG數(shù)據(jù)庫
        1.3.6 蛋白質(zhì)家族數(shù)據(jù)庫
    1.4 研究目的
2 材料和方法
    2.1 材料與設(shè)備
        2.1.1 供試昆蟲
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
3 氣體的制備">        2.1.4 PH₃ 氣體的制備
        2.1.5 抗性測定
        2.1.6 受試米象逆境處理
        2.1.7 數(shù)據(jù)處理
    2.2 米象轉(zhuǎn)錄組分析
        2.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.2 篩選代謝解毒基因
    2.3 cDNA全長擴增（RACE）
        2.3.1 引物設(shè)計
        2.3.2 米象RACE的cDNA合成模板
        2.3.3 米象代謝解毒基因5’RACE和3’RACE擴增
        2.3.4 cDNA全長序列的拼接及ORF擴增
        2.3.5 獲得米象代謝解毒基因全長序列分析
        2.3.6 構(gòu)建米象代謝解毒基因系統(tǒng)進化樹
    2.4 定量PCR
        2.4.1 前處理
        2.4.2 RNA的提取
        2.4.3 用DNase Ⅰ處理RNA去除基因組DNA
        2.4.4 RNA濃度測定
        2.4.5 cDNA的第一條鏈合成
        2.4.6 引物設(shè)計并鑒定引物質(zhì)量
        2.4.7 熒光定量PCR反應(yīng)
3 結(jié)果與分析
3 熏蒸品系的轉(zhuǎn)錄組分析">    3.1 米象敏感品系和PH₃ 熏蒸品系的轉(zhuǎn)錄組分析
3 熏蒸品系的轉(zhuǎn)錄組測序產(chǎn)量統(tǒng)計">        3.1.1 米象敏感品系和PH₃ 熏蒸品系的轉(zhuǎn)錄組測序產(chǎn)量統(tǒng)計
        3.1.2 數(shù)據(jù)組裝質(zhì)量
        3.1.3 Unigene在各數(shù)據(jù)庫中的比對結(jié)果
        3.1.4 Unigene分布概況
        3.1.5 Unigene的 GO以及COG分類
        3.1.6 米象解毒代謝基因的篩選鑒定
    3.2 米象差異表達基因分析
        3.2.1 差異表達基因功能注釋和富集分析
        3.2.2 差異表達基因的GO以及COG分類
        3.2.3 差異表達基因KEGG注釋
    3.3 米象解毒代謝基因表達模式分析
        3.3.1 米象GSTs基因表達模式
        3.3.2 米象EST基因表達模式
        3.3.3 米象P450 基因表達模式
    3.4 結(jié)論
4 展望
參考文獻
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動及成果情況


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]KEGG數(shù)據(jù)庫的進展及其在生物信息學(xué)中的應(yīng)用[J]. 李向真,劉子朋,李娟,方慧生.  藥物生物技術(shù). 2012(06)
[3]高通量轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)分析與基因發(fā)掘[J]. 周華,張新,劉騰云,余發(fā)新.  江西科學(xué). 2012(05)
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[5]基因本體論研究進展及在生物信息數(shù)據(jù)庫中的應(yīng)用[J]. 欒德琴,白云峰,包文斌,陳國宏.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(04)
[6]極端路徑分析及在色氨酸合成代謝網(wǎng)絡(luò)中的應(yīng)用[J]. 王棟,劉麗,趙志軍,須文波.  計算機與應(yīng)用化學(xué). 2009(04)
[7]昆蟲細胞色素P450基因的多樣性、進化及表達調(diào)控[J]. 郭亭亭,姜輝,高希武.  昆蟲學(xué)報. 2009(03)
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碩士論文
[1]短額負蝗三種蟲態(tài)的比較轉(zhuǎn)錄組及線粒體轉(zhuǎn)錄組作圖研究[D]. 楊婧.陜西師范大學(xué) 2013
[2]柑橘全爪螨不同品系轉(zhuǎn)錄組及基因表達譜差異分析[D]. 劉斌.西南大學(xué) 2012
[3]綠盲蝽刺吸脅迫誘導(dǎo)棉花SSH文庫的構(gòu)建與分析[D]. 李靜.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011



本文編號：2926502