發(fā)布時(shí)間：2020-12-19 20:09

　　米象是一種重要的貯藏害蟲,對(duì)世界糧食產(chǎn)量產(chǎn)生威脅,由于熏蒸劑磷化鋁的使用,米象產(chǎn)生了一定的PH₃抗性。本文通過(guò)轉(zhuǎn)錄組技術(shù),分析了米象幾種代謝解毒相關(guān)基因谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶,細(xì)胞色素P450和酯酶的表達(dá);獲得了米象基因遺傳信息。目前,隨著生物技術(shù)的進(jìn)步,尤其是基因組學(xué)的廣泛應(yīng)用,可以在轉(zhuǎn)錄組水平研究米象基因的表達(dá)情況,進(jìn)而從本質(zhì)上全面揭示米象的磷化氫抗性。采用Illumina測(cè)序技術(shù),米象敏感品系轉(zhuǎn)錄組測(cè)序共獲得reads是22,128,957和6,562,957,738個(gè)核苷酸,PH₃熏蒸品系轉(zhuǎn)錄組測(cè)序共獲得reads是27,306,829和8,093,178,954個(gè)核苷酸。將轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)通過(guò)組裝,將這些transcripts拼接成為42,173個(gè)unigenes。將得到Unigene提交蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（Nr）進(jìn)行比對(duì),共有16,610個(gè)返回有效結(jié)果。同時(shí)還將Unigene提交至其它數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行注釋,共有17,335個(gè)Unigene得到成功注釋。44.45%的Unigene與中歐山松大小蠹的相關(guān)基因同源性最高。26.96%的Unigene與赤擬谷盜... 

【文章來(lái)源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：102 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
1 前言
    1.1 米象抗藥性研究現(xiàn)狀
    1.2 昆蟲代謝解毒酶的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的研究進(jìn)展
        1.2.2 細(xì)胞色素P450 家族的研究現(xiàn)狀
        1.2.3 酯酶的研究進(jìn)展
    1.3 昆蟲轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究進(jìn)展
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)功能基因
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序研究基因差異表達(dá)
        1.3.3 Gene ontology（基因本體論）
        1.3.4 COG分析
        1.3.5 KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)
        1.3.6 蛋白質(zhì)家族數(shù)據(jù)庫(kù)
    1.4 研究目的
2 材料和方法
    2.1 材料與設(shè)備
        2.1.1 供試?yán)ハx
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
3 氣體的制備">        2.1.4 PH₃ 氣體的制備
        2.1.5 抗性測(cè)定
        2.1.6 受試米象逆境處理
        2.1.7 數(shù)據(jù)處理
    2.2 米象轉(zhuǎn)錄組分析
        2.2.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        2.2.2 篩選代謝解毒基因
    2.3 cDNA全長(zhǎng)擴(kuò)增（RACE）
        2.3.1 引物設(shè)計(jì)
        2.3.2 米象RACE的cDNA合成模板
        2.3.3 米象代謝解毒基因5’RACE和3’RACE擴(kuò)增
        2.3.4 cDNA全長(zhǎng)序列的拼接及ORF擴(kuò)增
        2.3.5 獲得米象代謝解毒基因全長(zhǎng)序列分析
        2.3.6 構(gòu)建米象代謝解毒基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)
    2.4 定量PCR
        2.4.1 前處理
        2.4.2 RNA的提取
        2.4.3 用DNase Ⅰ處理RNA去除基因組DNA
        2.4.4 RNA濃度測(cè)定
        2.4.5 cDNA的第一條鏈合成
        2.4.6 引物設(shè)計(jì)并鑒定引物質(zhì)量
        2.4.7 熒光定量PCR反應(yīng)
3 結(jié)果與分析
3 熏蒸品系的轉(zhuǎn)錄組分析">    3.1 米象敏感品系和PH₃ 熏蒸品系的轉(zhuǎn)錄組分析
3 熏蒸品系的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)">        3.1.1 米象敏感品系和PH₃ 熏蒸品系的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)
        3.1.2 數(shù)據(jù)組裝質(zhì)量
        3.1.3 Unigene在各數(shù)據(jù)庫(kù)中的比對(duì)結(jié)果
        3.1.4 Unigene分布概況
        3.1.5 Unigene的 GO以及COG分類
        3.1.6 米象解毒代謝基因的篩選鑒定
    3.2 米象差異表達(dá)基因分析
        3.2.1 差異表達(dá)基因功能注釋和富集分析
        3.2.2 差異表達(dá)基因的GO以及COG分類
        3.2.3 差異表達(dá)基因KEGG注釋
    3.3 米象解毒代謝基因表達(dá)模式分析
        3.3.1 米象GSTs基因表達(dá)模式
        3.3.2 米象EST基因表達(dá)模式
        3.3.3 米象P450 基因表達(dá)模式
    3.4 結(jié)論
4 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動(dòng)及成果情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]磷化氫熏蒸對(duì)米象抗性相關(guān)基因表達(dá)的影響[J]. 劉暢,胡飛,魯玉杰,魏兆軍.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(15)
[2]KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)的進(jìn)展及其在生物信息學(xué)中的應(yīng)用[J]. 李向真,劉子朋,李娟,方慧生.  藥物生物技術(shù). 2012(06)
[3]高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的數(shù)據(jù)分析與基因發(fā)掘[J]. 周華,張新,劉騰云,余發(fā)新.  江西科學(xué). 2012(05)
[4]谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的研究進(jìn)展[J]. 馮雪,王彬,孫艷香.  生物學(xué)教學(xué). 2012(06)
[5]基因本體論研究進(jìn)展及在生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)中的應(yīng)用[J]. 欒德琴,白云峰,包文斌,陳國(guó)宏.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(04)
[6]極端路徑分析及在色氨酸合成代謝網(wǎng)絡(luò)中的應(yīng)用[J]. 王棟,劉麗,趙志軍,須文波.  計(jì)算機(jī)與應(yīng)用化學(xué). 2009(04)
[7]昆蟲細(xì)胞色素P450基因的多樣性、進(jìn)化及表達(dá)調(diào)控[J]. 郭亭亭,姜輝,高希武.  昆蟲學(xué)報(bào). 2009(03)
[8]家蠶谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、序列分析及其表達(dá)模式[J]. 左偉東,余泉友,李斌,劉志,代方銀,魯成.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2007(04)
[9]昆蟲細(xì)胞色素P450的研究進(jìn)展及其介導(dǎo)的抗藥性[J]. 潘貽武,劉寧,劉小寧.  新疆農(nóng)業(yè)科學(xué). 2007(04)
[10]甲酸乙酯對(duì)米象乙酰膽堿酯酶和羧酸酯酶的影響[J]. 唐培安,鄧永學(xué),王進(jìn)軍.  植物保護(hù). 2007(01)

碩士論文
[1]短額負(fù)蝗三種蟲態(tài)的比較轉(zhuǎn)錄組及線粒體轉(zhuǎn)錄組作圖研究[D]. 楊婧.陜西師范大學(xué) 2013
[2]柑橘全爪螨不同品系轉(zhuǎn)錄組及基因表達(dá)譜差異分析[D]. 劉斌.西南大學(xué) 2012
[3]綠盲蝽刺吸脅迫誘導(dǎo)棉花SSH文庫(kù)的構(gòu)建與分析[D]. 李靜.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011



本文編號(hào)：2926502