家蠅(Musca domestica)是一種全球廣布性常見(jiàn)雙翅目昆蟲,其生存環(huán)境常常滋生大量的病原微生物,長(zhǎng)期的進(jìn)化使家蠅擁有了強(qiáng)大的先天性免疫系統(tǒng)。因此家蠅也逐漸成為人們研究先天性免疫的良好模型。在本研究中我們以家蠅為研究對(duì)象,通過(guò)家蠅轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選出了TRAF6的同源基因MdTRAF6,其表達(dá)受細(xì)菌刺激后上調(diào),我們推測(cè)它可能參與了家蠅的抗菌免疫反應(yīng)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證MdTRAF6在家蠅先天性免疫中的作用,我們檢測(cè)了免疫刺激后MdTRAF6的表達(dá)量變化,并且檢測(cè)了干擾MdTRAF6后抗菌肽以及相應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)量變化。同時(shí)我們意外發(fā)現(xiàn)利用RNAi方法敲低成蠅體內(nèi)MdTRAF6基因表達(dá)后,家蠅的產(chǎn)卵量及幼蟲存活率均受到明顯影響。另外本研究構(gòu)建了MdTRAF6基因亞細(xì)胞定位表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染到SF9細(xì)胞中,分析MdTRAF6在細(xì)胞中的分布情況。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下:1.qPCR及Western blot顯示MdTRAF6在幼蟲不同組織中均有分布,在腸道中表達(dá)量最高,脂肪體次之,血細(xì)胞中表達(dá)量最低。2.細(xì)菌攻毒實(shí)驗(yàn)表明MdTRAF6在細(xì)菌刺后表達(dá)量顯著上調(diào)。3.RNAi干擾家蠅幼蟲中MdTRAF6的表達(dá)后,抗菌肽Cecropin的表達(dá)量顯著上調(diào),Muscin、Attacin的表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著下調(diào),而Diptericin的表達(dá)量雖然呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)但是沒(méi)有顯著性。相關(guān)通路上轉(zhuǎn)錄因子的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)Relish的表達(dá)量上調(diào),Dorsal表達(dá)量下調(diào),JNK表達(dá)量沒(méi)有顯著性。4.MdTRAF6在家蠅不同發(fā)育階段的表達(dá)量不同,在整個(gè)幼蟲階段表達(dá)量相對(duì)較穩(wěn)定,呈低水平表達(dá),在蛹和成蟲期表達(dá)量最高。5.在成蠅階段干擾MdTRAF6基因表達(dá)會(huì)使得雌蠅累計(jì)產(chǎn)卵量與對(duì)照組相比明顯降低,同時(shí)子一代幼蟲的存活率也明顯降低。6.在SF9細(xì)胞中對(duì)MdTRAF6進(jìn)行亞細(xì)胞定位,結(jié)果顯示家蠅中TRAF6基因主要分布在細(xì)胞質(zhì)中。
【學(xué)位單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：Q965
【部分圖文】：

圖 1-1 脊椎動(dòng)物中 TRAF6 的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制（Walsh,et al，2015）Figure 1-1 Signal transduction mechanism of TRAF6 in vertebrates.已經(jīng)有研究報(bào)道 TRAF6 在哺乳動(dòng)物的各個(gè)組織中都有表達(dá)，為了更進(jìn)一步了RAF6 的具體功能和作用，研究人員利用基因敲除技術(shù)建立了 TRAF6 敲除鼠模型。掉 TRAF6 基因的小鼠會(huì)表現(xiàn)出嚴(yán)重的石骨癥，胸腺萎縮，淋巴器官缺陷，脾腫大產(chǎn)期死亡等現(xiàn)象，這說(shuō)明 TRAF6 基因可能在免疫機(jī)制中起著重要的作用(Naito et a999)。研究人員為了進(jìn)一步確定 TRAF6 在哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)中的具體作用，利RAF6 缺陷供體骨髓制備了骨髓嵌合體小鼠，并展示了多種缺陷，包括淋巴組織紊炎癥性自身免疫病等，這些嵌合小鼠免疫系統(tǒng)破壞的嚴(yán)重程度揭示 TRAF6 在許多細(xì)胞類型中的重要作用(Chiffoleau et al., 2003)。此外，胸腺上皮細(xì)胞（TRAF6ΔTEC TRAF6 的特異性缺失導(dǎo)致胸腺髓質(zhì)區(qū)域減少以及自身免疫性肝炎和自身抗體產(chǎn)Bonito et al., 2013)，表明 TRAF6 通過(guò)調(diào)節(jié)胸腺淋巴細(xì)胞的發(fā)育，在中樞耐受中起到作用。

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文染時(shí)起做用(Costa et al., 2009)。這是因?yàn)楦锾m糖可以通過(guò) PGRP-LC 誘導(dǎo) Imd 途經(jīng)的激活(G不僅可以通過(guò)革蘭氏陽(yáng)性菌依賴的方式激活 T聚糖，誘導(dǎo)激活 Imd 途經(jīng)。圖 1-2 顯示了 Toll控。已經(jīng)有研究報(bào)道 Imd 途徑可能是 TAK1 下游的微生物肽的合成，還可以通過(guò) JNK 級(jí)聯(lián)放大作達(dá)。通過(guò)相同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，JNK 信號(hào)通路可體的免疫應(yīng)答，從而使生物體在免疫防御與組003)。

圖 3.1 MdTRAF6 的氨基酸組成及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)氨基酸組成，圖 B 和 C 分別表示 MdTRAF6 的結(jié)rediction of amino acid composition and structure o composition of MdTRAF6, panels B and C repr of MdTRAF6, respectively保守性分析MdTRAF6 蛋白序列的保守性，我們首先使進(jìn)行保守性預(yù)測(cè)（圖 3.2A），之后使用 B物種的 TRAF6 蛋白序列進(jìn)行了多重序列AF6 同源物種有很多共有的氨基酸，并且 RAF6 蛋白的 3 個(gè)特征性結(jié)構(gòu)域（RING，。這說(shuō)明 MdTRAF6 蛋白與其他同源物種
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉明龍;劉天喜;安海倩;崔雪;李燕;周森;王鳳麗;;復(fù)腎顆粒對(duì)脂多糖誘導(dǎo)下人腎小管上皮細(xì)胞TRAF6表達(dá)的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2017年07期

2 李霞,肖明振,余擎,趙守亮,朱明慧,汪衛(wèi)國(guó),李鋒;TRAF6在大鼠牙胚發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

3 章國(guó)良;孫元水;唐智亮;魯航;胡搶;倪海濱;;TRAF6表達(dá)與胃癌患者營(yíng)養(yǎng)狀況及預(yù)后的關(guān)系[J];中華腫瘤防治雜志;2017年14期

4 張娜,楊富生,劉艷麗,徐建立;體外培養(yǎng)破骨細(xì)胞TRAF6的表達(dá)[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2005年04期

5 張亞樓;鄧強(qiáng);周楊俊杰;趙陽(yáng);郭瓊;蔣稥菊;岳明明;陳龍;馬文靜;;構(gòu)建TRAF6基因3’非編碼區(qū)熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒驗(yàn)證及與潛在靶基因TRAF6的靶向關(guān)系[J];中國(guó)組織工程研究;2019年27期

6 王玉萍;王玲玲;胡玉娜;郭軍輝;郭志忠;;TRAF6在食管癌中的表達(dá)及臨床意義[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2015年12期

7 張芷毓;歐德瓊;鄔明麗;樊英智;高源;李世鵬;賴振雨;雷初朝;黨瑞華;;秦川牛TRAF6基因多態(tài)及其與體尺性狀的關(guān)聯(lián)分析[J];中國(guó)牛業(yè)科學(xué);2018年04期

8 任婷婷;張廣宇;王泰賀;武鑫銘;吳琦;郭素芬;;TRAF6、HIF-1α在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及與微血管密度的相關(guān)性研究[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2017年03期

9 王健;米小軼;代文博;;TRAF6表達(dá)與乳腺癌侵襲能力的關(guān)系[J];遼寧大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年01期

10 陳開健;王靜安;劉巧林;王榮華;徐瑩;趙鑫;肖調(diào)義;;赤眼鱒TRAF6基因的cDNA克隆及其應(yīng)對(duì)GCRV的免疫表達(dá)特性[J];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2016年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 孟召友;A20調(diào)控TRAF6聚泛素化在腦出血繼發(fā)性損傷中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2017年

2 施云峰;TRAF6調(diào)控基質(zhì)細(xì)胞增殖在前列腺增生帶性差異中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年

3 陳鋒;TRAF6基因沉默對(duì)內(nèi)毒素炎癥反應(yīng)的抑制效應(yīng)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

4 孫華林;失神經(jīng)肌萎縮的蛋白質(zhì)組學(xué)研究及TRAF6在肌萎縮中的調(diào)控作用研究[D];蘇州大學(xué);2014年

5 魏勁松;miRNA-146a通過(guò)抑制IRAK1和TRAF6基因調(diào)控脊髓損傷炎癥反應(yīng)[D];暨南大學(xué);2017年

6 張道良;心房纖維化機(jī)制研究—房顫患者M(jìn)APKs/TGF-β1/TRAF6信號(hào)通路的變化[D];上海交通大學(xué);2015年

7 賀曉;USP2a通過(guò)去泛素化TRAF6負(fù)調(diào)控NF-κB的激活[D];武漢大學(xué);2012年

8 王戩萌;miR-146a通過(guò)TRAF6調(diào)控中樞內(nèi)源性IFN-β參與實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎病程發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2016年

9 朱稀雯;NASH中自噬通過(guò)TRAF6介導(dǎo)的泛素化抑制Kupffer細(xì)胞NLRP3炎癥小體激活機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

10 崔迎彬;神經(jīng)生長(zhǎng)因子高親和力受體TrkA/真核翻譯起始因子4A1（eIF4A1），干擾素-λ受體1（IFN-λR1）/腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（TRAF6）相互作用的分子機(jī)制及功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王曉芬;TRAF6在家蠅免疫及生殖中的作用[D];河北大學(xué);2019年

2 李富祥;花鱸Toll通路關(guān)鍵因子TRAF6和IRAK4基因在細(xì)菌刺激下的表達(dá)分析與功能研究[D];上海海洋大學(xué);2018年

3 程永峰;TRAF6在成釉細(xì)胞瘤中表達(dá)的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

4 程玨;TRAF6在大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)物模型表達(dá)的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

5 喬永強(qiáng);兒童乳牙根生理性吸收不同時(shí)期破牙細(xì)胞表達(dá)RANKL和TRAF6的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

6 洪學(xué)志;不同成熟狀態(tài)下樹突狀細(xì)胞與TRAF6間的關(guān)系[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2016年

7 徐燦;TRAF6在人肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及作用機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

8 陳子文;缺血性中風(fēng)TRAF6基因多態(tài)性與mRNA、炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平及MRI表現(xiàn)的相關(guān)性研究[D];廣西中醫(yī)藥大學(xué);2017年

9 任娟;IL-1β干預(yù)下TRAF6在牙周膜成纖維細(xì)胞中表達(dá)的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

10 劉宗杰;TRAF6、ERK、p-ERK在腦梗死大鼠腦組織的表達(dá)及槐定堿對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠神經(jīng)保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2835355