【摘要】：AKIRIN2作為一個高度保守的核內因子,通過與其它蛋白形成復合物來調控靶基因進而發(fā)揮生物學功能。目前,有關AKIRIN2蛋白研究主要是集中于肌肉發(fā)育和免疫調控領域,而對于akirin2基因自身轉錄調控機制研究未見報道。啟動子和miRNA在目的基因的轉錄前和轉錄后調控過程中發(fā)揮關鍵作用,本研究以雞為模式動物,克隆不同品系雞akirin2基因5'-端上游2832 bp序列和3'-端下游417 nt序列,通過生物信息學分析預測獲得miR-142-3p可能靶向akirin2基因3'非翻譯區(qū)(3'UTR),綜合分析miR-142-3p和miR-142-5p的表達與功能特性,主要研究結果如下:首先,本研究克隆了海藍褐雞、AA~+雞和三黃雞的akirin2基因啟動子區(qū)2832bp序列,并進行序列比對和生物信息學分析。結果表明:蛋雞(海藍褐雞)和肉雞(AA~+雞和三黃雞)之間一共有38個SNP位點,而AA~+雞和三黃雞之間只有4個SNP位點;通過轉錄因子預測發(fā)現(xiàn),蛋雞與肉雞間的19個SNP位點導致了轉錄因子結合位點改變,進而導致蛋雞和肉雞在轉錄因子的種類和數(shù)量上存在差異;通過CpG島預測發(fā)現(xiàn),蛋雞和肉雞間CpG島序列差異不大,但有較多的SNP位點分布在CpG島內。推測不同品系雞間的akirin2基因啟動子調控機制存在差異。其次,本研究克隆了海藍褐雞、AA~+雞和三黃雞的akirin2基因終止密碼子下游3'UTR部分417nt序列,并進行序列比對和生物信息學分析。結果表明:三個品系雞中3'UTR部分序列完全一致,推測不同品系雞akirin2基因的轉錄后調控機制相似,生物信息學預測發(fā)現(xiàn)miR-142-3p可能靶向3'UTR序列。最后,pri-miR-142部分序列分析表明:三個品系雞pri-miR-142序列完全一致。miR-142-3p/5p組織表達譜表明:三個品系雞中miR-142-3p/5p在各組織中廣泛表達,miR-142-3p/5p的表達活性與組織發(fā)育和免疫功能相關,并且miR-142-3p相比miR-142-5p可能更具有功能多樣性。miR-142-3p/5p在炎癥模型和疫苗免疫模型的組織表達譜分析表明,miR-142-3p/5p均參與炎癥反應和免疫應答,并且在不同免疫組織中發(fā)揮著不同的調控作用;miR-142-3p和miR-142-5p間表達活性差異可能與二者的功能特性、不同品系雞性狀以及不同病理過程等相關。本研究表明akirin2啟動子序列SNP位點可能是影響不同品系雞akirin2基因表達活性差異的關鍵因素之一。研究akirin2基因啟動子及其相關miR-142表達與特性,對于深入理解akirin2基因表達調控機制和miR-142在炎癥與免疫中的功能與應用,具有重要的理論和實踐意義。
【學位授予單位】：哈爾濱師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：Q78
【圖文】：

15圖 2-1 akirin2 基因啟動子序列 PCR 結果對分子量標準；P1-P3：akirin2 基因啟動子 Pig.2-1 PCR products of akirin2 gene promoterrelative molecular mass standard; P1-P3: PCR p

圖 2-2 akirin2 基因啟動子重組質粒單酶切鑒定 DNA 相對分子量標準；P1-P3：akirin2 基因啟動子單酶切產(chǎn)物gle enzyme digestion results of akirin2 gene promoter recombinant prelative molecular mass standard; P1-P3: Single enzyme digestion re基因啟動子測序結果及不同品系雞序列比對

圖 2-4 akirin2 基因啟動子序列同源性分析：NC_000070.6）；人（GenBank：NC_000006.12）；黑猩獼猴（GenBank: NC_027896.1）；牛（GenBank：NC_03C_006090.5）；AA+雞（GenBank：MK478013）；三黃雞褐雞（GenBank：MK478013）；綠頭鴨（GenBank：NCBank：NC_036854.1）；斑馬魚（GenBank：NC_00713130681.1）；澳洲咸水鱷（GenBank：NW_017728918.1）；NW_019776320.1）Fig.2-3 Homologous analysis of akirin2 gene promoterenBank: NC_000070.6); Homo sapiens(GenBank： NC_nBank: NC_036885.1); Macaca mulatta(GenBank: NC_0: NC_037336.1); Gallus gallus(Genbank: NC_006090.5);A; Sanhuang broiler(GenBank: MK478014); Hi-Line Brown lAnas platyrhynchos(GenBank: NC_040048.1); Salvelinus a1); Danio rerio(GenBank： NC_007131.7); Xenopus tropic

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本文編號：2780965