【摘要】：鮮剝大蒜食用方便,符合現(xiàn)代社會快節(jié)奏的生活,但其在貯藏過程中易發(fā)生色澤發(fā)黃、生根發(fā)芽、霉變等品質(zhì)劣變現(xiàn)象,大大降低經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本文針對鮮剝大蒜易腐敗變質(zhì)的問題,分離鑒定了鮮剝大蒜的致腐霉菌,并采用臭氧作為抑菌劑,探究了離體和活體條件下,不同臭氧條件對鮮剝大蒜致腐霉菌的抑菌效果,并優(yōu)化出了較優(yōu)的臭氧處理?xiàng)l件。隨后,采用較優(yōu)條件下的臭氧處理鮮剝大蒜的致腐霉菌,分別對處理和未經(jīng)臭氧處理的致腐霉菌進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序和表達(dá)基因差異性分析,為臭氧對鮮剝大蒜致腐霉菌的抑菌機(jī)理提供理論參考。(1)采用平板劃線法共分離純化出四株鮮剝大蒜的致腐霉菌,通過菌株形態(tài)特征描述、菌絲顯微鏡特征觀察和分子生物學(xué)分析,得到本實(shí)驗(yàn)分離出的鮮剝大蒜致腐霉菌分別為:Penicillium citrinum strain(桔青霉)、Rhizopus stolonifer strain(匍枝根霉)、Gibberella intermedia strain(赤霉)、Aspergillus ochraceus strain(赭曲霉)。(2)離體條件下,采用不同條件臭氧分別處理致腐霉菌。結(jié)果表明,臭氧處理可有效抑制四株霉菌的菌絲生長,改變菌體形態(tài),破壞細(xì)胞膜完整性,使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、多糖等物質(zhì)流出,導(dǎo)致菌懸液的電導(dǎo)率升高,使其死亡。綜合來看,當(dāng)臭氧濃度為6~8ppm,處理時(shí)間為15~20min,處理溫度為20~25℃,處理濕度為90%時(shí),對四種致腐霉可達(dá)到較優(yōu)的離體抑制效果。(3)活體條件下,對臭氧的抑菌條件進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。采取不同條件臭氧分別處理有傷接種桔青霉、匍枝根霉、赤霉和赭曲霉后的鮮剝大蒜。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,臭氧濃度、處理時(shí)間和濕度對鮮剝大蒜各項(xiàng)指標(biāo)影響顯著,而臭氧處理溫度對其影響則無顯著性差異。接種四種致腐霉菌后的鮮剝大蒜的較優(yōu)的臭氧處理?xiàng)l件均為濃度6ppm、時(shí)間15min,溫度20℃,濕度90%。經(jīng)上述條件處理后,在貯藏期間能明顯降低鮮剝大蒜的菌落總數(shù)、霉菌和酵母總數(shù)、發(fā)病率、病斑直徑和病斑深度,達(dá)到較好的殺菌抑制效果。(4)采用臭氧(臭氧濃度6ppm、處理時(shí)間15min,處理溫度20℃,處理濕度90%)分別處理桔青霉、匍枝根霉、赤霉和赭曲霉,對處理和未經(jīng)臭氧處理的四株霉菌分別進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序和表達(dá)基因差異性分析。結(jié)果表明,臭氧抑制桔青霉生長時(shí),篩選得到1531個(gè)顯著差異表達(dá)基因,922個(gè)上調(diào)表達(dá)基因,610個(gè)下調(diào)表達(dá)基因,影響了細(xì)胞、催化活性、生物調(diào)節(jié)、氨基酸代謝和碳水化合物代謝等通路。臭氧抑制匍枝根霉生長時(shí),篩選得到970個(gè)顯著差異表達(dá)基因,546個(gè)上調(diào)表達(dá)基因,424個(gè)下調(diào)表達(dá)基因,影響了細(xì)胞、催化活性、結(jié)合過程、碳水化合物代謝、氨基酸代謝和翻譯過程。臭氧抑制赤霉生長時(shí),篩選得到2754個(gè)顯著差異表達(dá)基因,1456個(gè)上調(diào)表達(dá)基因,1298個(gè)下調(diào)表達(dá)基因,影響了催化活性、結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)活性、細(xì)胞過程、氨基酸代謝、碳水化合物代謝、脂代謝等途徑。臭氧抑制赭曲霉生長時(shí),篩選得到2378個(gè)顯著差異表達(dá)基因,1591個(gè)上調(diào)表達(dá)基因,787個(gè)下調(diào)表達(dá)基因,影響了細(xì)胞、細(xì)胞器部分、催化活性、結(jié)合過程、氨基酸代謝、整體概述、脂代謝過程等通路。
【學(xué)位授予單位】：西華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS201.3
【圖文】：

（a）菌落形態(tài) （b）10×10 （c）10×40圖 2.1 dm1 在培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)和菌絲形態(tài)（b: 10×10, c: 10×40）Fig. 2.1 Colony morphological characteristics and mycelial morphology of dm1 (b: 10×10, c: 10×40)2.3.2.2 dm4 菌落形態(tài)和菌絲形態(tài)dm4 菌在 PDA 培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)如圖 2.2（a）所示。dm4 菌的生長速度極快，短時(shí)間即可布滿整個(gè)平板，菌落會隨生長時(shí)間的延長而從白色變?yōu)榛野咨�，最后會呈現(xiàn)黑褐色，具有疏松的絨毛狀，表面干燥。如圖（b）和（c）所示，分別為 dm4 菌在 10×10 倍和 10×40 倍顯微鏡下的菌絲形態(tài)。其具有細(xì)長的菌絲，菌絲下端生出假根，其頂端膨大的部分為孢子囊，假根與孢子囊之間為細(xì)長的孢子囊梗。假根分枝較多，生長迅速且雜亂無章，表面光滑；孢子囊呈圓形，外壁平滑，成熟時(shí)半徑為 80~110μm；孢子囊梗起初為白色，隨培養(yǎng)時(shí)間延長，逐漸變?yōu)槿鐖D所示的黑褐色，其呈細(xì)長、無分枝狀，表面光滑，無分隔。根據(jù) dm4 菌菌落形態(tài)特征和菌絲顯微結(jié)構(gòu)，通過查閱參考文獻(xiàn)，其形態(tài)特征與根霉類似。

（a）菌落形態(tài) （b）10×10 （c）10×40圖 2.1 dm1 在培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)和菌絲形態(tài)（b: 10×10, c: 10×40）Fig. 2.1 Colony morphological characteristics and mycelial morphology of dm1 (b: 10×10, c: 10×40)2.3.2.2 dm4 菌落形態(tài)和菌絲形態(tài)dm4 菌在 PDA 培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)如圖 2.2（a）所示。dm4 菌的生長速度極快，短時(shí)間即可布滿整個(gè)平板，菌落會隨生長時(shí)間的延長而從白色變?yōu)榛野咨�，最后會呈現(xiàn)黑褐色，具有疏松的絨毛狀，表面干燥。如圖（b）和（c）所示，分別為 dm4 菌在 10×10 倍和 10×40 倍顯微鏡下的菌絲形態(tài)。其具有細(xì)長的菌絲，菌絲下端生出假根，其頂端膨大的部分為孢子囊，假根與孢子囊之間為細(xì)長的孢子囊梗。假根分枝較多，生長迅速且雜亂無章，表面光滑；孢子囊呈圓形，外壁平滑，成熟時(shí)半徑為 80~110μm；孢子囊梗起初為白色，隨培養(yǎng)時(shí)間延長，逐漸變?yōu)槿鐖D所示的黑褐色，其呈細(xì)長、無分枝狀，表面光滑，無分隔。根據(jù) dm4 菌菌落形態(tài)特征和菌絲顯微結(jié)構(gòu)，通過查閱參考文獻(xiàn)，其形態(tài)特征與根霉類似。

西華大學(xué)碩士學(xué)位論文2.3.2.3 dm5 菌落形態(tài)和菌絲形態(tài)如圖 2.3（a）所示為 dm5 菌在培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)。dm5 菌在培養(yǎng)過程中呈中等速度生長，菌落顏色始終未白色，為稠密的絮狀結(jié)構(gòu)，菌落表面有褶皺和凹凸，邊緣分布不規(guī)則，呈放射狀，表面呈濕潤的狀態(tài)。如圖 2.7（b）和（c）所示，分別為 dm5 菌在 10×10 倍和 10×40 倍光學(xué)顯微鏡下的菌絲形態(tài)特征。霉菌 dm5 的菌絲細(xì)長、稠密，并且分枝較多，從主干菌絲逐漸長出分枝菌絲，再繼續(xù)分枝，顏色呈現(xiàn)灰白色，外壁粗糙；dm5 的孢子呈白色，大多呈球形，數(shù)量較少。根據(jù) dm5 菌菌落形態(tài)特征和菌絲顯微結(jié)構(gòu)，通過查閱參考文獻(xiàn)，其形態(tài)特征與赤霉類似。

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