【摘要】：七鰓鰻是迄今為止在海洋生物中發(fā)現(xiàn)的最原始的無(wú)頜類(lèi)脊椎動(dòng)物之一。其化石距今約3.6億年,因此七鰓鰻被稱(chēng)為“活化石”。由于其在進(jìn)化地位上的特殊性,長(zhǎng)久以來(lái),七鰓鰻都具有很大的研究?jī)r(jià)值。Nucleolin是真核細(xì)胞核仁中一種重要的蛋白質(zhì),具有多種重要的細(xì)胞功能,在細(xì)胞增殖、死亡、免疫,尤其在rRNA合成和免疫中扮演重要的角色。本論文首次在日本七鰓鰻(Lampetra japonica)中發(fā)現(xiàn)了nucleolin(核仁素,C23)的同源物(nucleolin-like),對(duì)其進(jìn)行了研究,初步取得了如下研究成果。首先,本論文成功從日本七鰓鰻的白細(xì)胞cDNA文庫(kù)中克隆出長(zhǎng)度為1941bp,編碼為646個(gè)氨基酸的nucleolin-like全長(zhǎng)基因。經(jīng)過(guò)同源序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),該基因和其他脊椎動(dòng)物nucleolin具有約50%的同源性。同時(shí),構(gòu)建了不同物種nucleolin的進(jìn)化樹(shù),發(fā)現(xiàn)nucleolin-like的進(jìn)化位置介于無(wú)脊椎動(dòng)物和魚(yú)類(lèi)之間,與七鰓鰻在物種進(jìn)化中的位置一致。其次,將nucleolin-like C端片段進(jìn)行克隆并構(gòu)建到pET-28a載體中,獲得原核表達(dá)重組質(zhì)粒。在E.coli BL21中表達(dá)原核蛋白,并純化。用純化蛋白免疫新西蘭大白兔,制備得到anti-nucleolin-like多克隆抗體,并驗(yàn)證了抗體的效價(jià)和特異性。通過(guò)real-time PCR、western blot和流式細(xì)胞術(shù)分析手段對(duì)nucleolin-like在日本七鰓鰻體內(nèi)組織分布以及表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,nucleolin-like在日本七鰓鰻白細(xì)胞和所有組織的mRNA水平均有表達(dá),而在白細(xì)胞、鰓、腎和髓組織中的表達(dá)量更為明顯。最后,以Poly(I:C)刺激日本七鰓鰻白細(xì)胞,白細(xì)胞中nucleolin-like的mRNA水平和蛋白表達(dá)水平在Poly(I:C)的刺激下均有提高。同時(shí)發(fā)現(xiàn),Poly(I:C)的刺激能夠使nucleolin-like由細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)中。以上結(jié)果表明,nucleolin-like在七鰓鰻的先天性免疫應(yīng)答中可能扮演著與人源nucleolin相似的重要角色。綜上所述,本論文首次在日本七鰓鰻中發(fā)現(xiàn)并克隆得到了nucleolin-like的全長(zhǎng)基因;成功制備了anti-nucleolin-like的多克隆抗體;探明了其在日本七鰓鰻各組織中的分布;對(duì)Poly(I:C)刺激后nucleolin-like在細(xì)胞中的表達(dá)與轉(zhuǎn)位情況進(jìn)行了初探。為進(jìn)一步研究nucleolin-like在七鰓鰻先天性免疫中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

日本七鰓鰻 Nucleolin-like基因的克隆及其在先天性免疫中的功能初探本七鰓鰻的白細(xì)胞總 RNA七鰓鰻的白細(xì)胞中提取總 RNA，用分光光度計(jì)檢測(cè)其0 為 1.92，處于 1.8-2.0 范圍內(nèi)，說(shuō)明 RNA 純度較好。根據(jù)計(jì)算μg/mL，取 2 μL RNA 溶液進(jìn)行電泳檢測(cè)。結(jié)果顯示，白細(xì)胞 R帶較為清楚（圖 2.1），證明 RNA 的提取效果較好。

圖 2.2 日本七鰓鰻 nucleolin-like EST 序列 PCR 電泳圖M: DL 5000 Marker; 1: Nucleolin-like EST 序列Fig. 2.2 PCR electropherogram of nucleolin-like EST sequence of L. japonicM: DL 5000 Marker; 1: The nucleolin-like EST sequenceucleolin-like EST 序列與 T 載體連接，，并轉(zhuǎn)化到 DH5α中，之后進(jìn)粒（圖 2.3），提質(zhì)粒（圖 2.4）后送往生物公司進(jìn)行測(cè)序。
【學(xué)位授予單位】：遼寧師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：Q78;Q95

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張撼;董彥嬌;李長(zhǎng)炙;逄越;李慶偉;;日本七鰓鰻鈣調(diào)蛋白分子克隆、組織定位及功能分析[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2017年03期

2 趙春暉;王丹;徐瑋;劉欣;李慶偉;;日本七鰓鰻含硒谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4的克隆與生物學(xué)特性分析[J];遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2015年01期

3 寇研;;歐洲饑餓啟示錄[J];戀愛(ài)婚姻家庭.養(yǎng)生;2017年01期

4 李慶偉;馮波;陳立勇;吳芬芳;蘇鵬;趙春暉;;雷氏七鰓鰻(Lampetra reissneri)消化系統(tǒng)組成及消化液主要組分的鑒定分析[J];遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年02期

5 謝鵬;曹瀛;張迎秋;林琳;陳操;;日本七鰓鰻唾液腺分泌低含量蛋白的組分鑒定[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)(上半月刊);2011年09期

6 王曉光;于偉君;李軍;石俊艷;魏宏祥;宣明春;寇凌霄;齊鶴;劉勇;吳瑞蘭;;雷氏七鰓鰻耗氧率和窒息點(diǎn)的研究[J];大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào);2011年02期

7 張凱,郭文場(chǎng),周玉,李訓(xùn)德;日本七鰓鰻營(yíng)養(yǎng)成分分析[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2000年04期

8 張凱,郭文場(chǎng),李訓(xùn)德,楊柏明;日本七鰓鰻肌肉脂肪酸的組成分析[J];中國(guó)水產(chǎn)科學(xué);2000年01期

9 樸仁峰;金龍勛;;圖們江日本七鰓鰻形態(tài)構(gòu)造的觀察[J];延邊農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);1987年02期

10 景國(guó)榮;王岫彬;何迎春;劉強(qiáng);;日本七鰓鰻Lampetra Japonica(Martens)腸管的組織學(xué)結(jié)構(gòu)[J];哈爾濱師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào);1988年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉雪嬌;侯林;馬飛;;日本七鰓鰻?zhēng)锥≠|(zhì)酶基因的克隆及功能的初步研究[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)生理學(xué)會(huì)第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2009年

2 宋德利;吳芬芳;郭仁勇;蘇鵬;李慶偉;;日本七鰓鰻與雷氏七鰓鰻形態(tài)學(xué)比較新發(fā)現(xiàn)[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)生理學(xué)會(huì)第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2009年

3 高琪;馬飛;李慶偉;;日本七鰓鰻(Lampetra japonica)口腔腺內(nèi)兩種不同的血清白蛋白的比較分析[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

4 徐揚(yáng);逢越;李慶偉;;七鰓鰻——一種重要的模式生物[A];第三屆“模式生物與人類(lèi)健康”發(fā)育遺傳學(xué)全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2014年

5 李慶偉;;七鰓鰻可變淋巴細(xì)胞受體介導(dǎo)的補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒作用(英文)[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 吳芬芳;劉欣;蘇鵬;李默;李慶偉;;日本七鰓鰻新蛋白CD29的鑒定及組織定位研究[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)生理學(xué)會(huì)第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2009年

7 蘇鵬;吳芬芳;宋德利;李默;劉欣;李慶偉;;CD9在日本七鰓鰻免疫中作用的初探[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)生理學(xué)會(huì)第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2009年

8 薛壯;劉欣;李慶偉;;日本七鰓鰻特異表達(dá)與proteinG特異性結(jié)合的新型血清凝集素[A];全國(guó)生物遺傳多樣性高峰論壇會(huì)刊[C];2012年

9 蘇鵬;吳芬芳;劉欣;李慶偉;;日本七鰓鰻CD9分子的基因克隆、表達(dá)以及免疫學(xué)活性研究[A];全國(guó)生物遺傳多樣性高峰論壇會(huì)刊[C];2012年

10 高琪;逄越;吳毓;馬飛;李慶偉;;日本七鰓鰻(Lampetra japonica)口腔腺表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)分析[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 陶婷婷;揭示雄性七鰓鰻吸引異性的秘密[N];上海科技報(bào);2019年

2 鐘科;七鰓鰻三期生命史1.25億前已存在[N];中國(guó)國(guó)土資源報(bào);2014年

3 記者 李大慶;七鰓鰻三期生命史億年前已存在[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

4 記者　 延宏;七鰓鰻起源于海洋生活在淡水[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

5 記者　武衛(wèi)政;七鰓鰻新屬種“浮出水面”[N];人民日?qǐng)?bào);2006年

6 記者　 齊芳;化石研究發(fā)現(xiàn)七鰓鰻新屬種[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

7 盛務(wù)桐;是什么決定了頜的形成[N];北京科技報(bào);2002年

8 記者 耿挺;向史前生物“借”工具[N];上�？萍紙�(bào);2019年

9 劉國(guó)霖;寧安五珍[N];黑龍江日?qǐng)?bào);2006年

10 華凌;世界唯一兩棲“蠑螈”機(jī)器人Ⅱ亮相[N];科技日?qǐng)?bào);2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 宋濤;七鰓鰻RIG-I和MAVS的分子特征及其在抗病毒免疫中的信號(hào)通路[D];遼寧師范大學(xué);2018年

2 勾萌;七鰓鰻LIP蛋白對(duì)細(xì)胞膜脂筏區(qū)糖和脂分子的識(shí)別[D];遼寧師范大學(xué);2018年

3 孫晶;七鰓鰻過(guò)氧化物還原酶2（Peroxiredoxin2）基因克隆、表達(dá)及生物學(xué)活性研究[D];遼寧師范大學(xué);2010年

4 曹冬冬;文昌魚(yú)VLR樣蛋白[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2017年

5 吳芬芳;七鰓鰻可變淋巴細(xì)胞受體介導(dǎo)的補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒作用[D];遼寧師范大學(xué);2012年

6 鐘英斌;類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3（IGFBP-3）的作用機(jī)制及功能進(jìn)化研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊?lèi)?基于Biacore技術(shù)研究與七鰓鰻免疫蛋白LIP相互作用的分子[D];遼寧師范大學(xué);2019年

2 王大宇;七鰓鰻serpin蛋白在病原體感染的天然免疫防御中的功能研究[D];遼寧師范大學(xué);2019年

3 王棟;七鰓鰻grn基因進(jìn)化分析及生物學(xué)功能初步研究[D];遼寧師范大學(xué);2019年

4 趙晶;日本七鰓鰻Syk分子的重組表達(dá)以及相關(guān)免疫學(xué)研究[D];遼寧師范大學(xué);2019年

5 梁文靜;日本七鰓鰻NICIR受體克隆表達(dá)、抗體制備及相關(guān)免疫學(xué)研究[D];遼寧師范大學(xué);2019年

6 趙歡;日本七鰓鰻nucleolin-like基因的克隆及其在先天性免疫中的功能初探[D];遼寧師范大學(xué);2019年

7 華一杉;TLR接頭分子的起源進(jìn)化及日本七鰓鰻TICAM-a和TICAM-b的功能初探[D];遼寧師范大學(xué);2019年

8 郜迷層;日本七鰓鰻BCAP基因克隆、重組表達(dá)及相關(guān)免疫學(xué)研究[D];遼寧師范大學(xué);2019年

9 渠成名;日本七鰓鰻Lja-SHP2分子的克隆、重組表達(dá)以及相關(guān)免疫學(xué)研究[D];遼寧師范大學(xué);2018年

10 劉爽;HMGB1蛋白在日本七鰓鰻中組織定位及免疫學(xué)功能研究[D];遼寧師范大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2688781