【摘要】：感受體內(nèi)外溫度變化是生物與生俱來的能力,可有效的調(diào)節(jié)和保持體溫。溫度敏感TRP(Transient receptor potential,TRP)通道為主要的細(xì)胞溫度感受器,但有關(guān)人類和哺乳動物溫度敏感行為的分子細(xì)胞整合機(jī)制仍不甚清楚。本論文探究出生后早期大鼠和小鼠冷敏響應(yīng)的發(fā)育關(guān)鍵期,確定出生后早期大鼠和小鼠冷敏行為與TRPA1通道表達(dá)的相關(guān)性,篩查TRPA1通道與冷敏響應(yīng)發(fā)育相關(guān)的內(nèi)源性表達(dá)調(diào)控機(jī)制,以期豐富靶向研究TRPA1通道溫敏的調(diào)控機(jī)制。因此本論文檢測出生后1天(D)-6周(W)大鼠和TRPA1~(-/-)與TRPA1~(+/+)(WT)小鼠冷敏行為、qRT-PCR檢測大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)冷敏TRP通道m(xù)RNA、膜片鉗記錄大鼠DRG TRPA1通道電流以及Tenascins對轉(zhuǎn)染mTRPA1通道電流的影響。主要結(jié)果如下:1.大鼠冷敏行為發(fā)育變化(1)3W-4W大鼠的體重增加最快,是大鼠體重發(fā)育關(guān)鍵期。(2)9℃和13℃大鼠冷刺激縮足閾值都在3W潛伏期最短,并在4W出現(xiàn)快速上升,是大鼠冷敏行為發(fā)育關(guān)鍵時(shí)期。大鼠冷敏行為隨著周齡呈規(guī)律變化,具有周齡依賴性,且刺激溫度越低,大鼠反應(yīng)越敏感。2.大鼠DRG冷敏TRP通道m(xù)RNA表達(dá)的發(fā)育變化各周齡TRPC5 mRNA表達(dá)量較1D齡大鼠均顯著下調(diào)。TRPM8 mRNA表達(dá)量在1W-3W顯著上調(diào),4W-6W顯著下調(diào)。TRPA1 mRNA 2W-6W表達(dá)顯著上調(diào),4W相對3W快速下降。大鼠DRG細(xì)胞冷敏TRP通道(TRPC5、TRPM8、TRPA1)mRNA表達(dá)具有周齡依賴性并且3W-4W可能是TRPA1和TRPM8 mRNA表達(dá)發(fā)育關(guān)鍵期。3.大鼠DRG TRPA1通道電流的發(fā)育變化采用電生理膜片鉗記錄出生后3D-6W大鼠DRG TRPA1通道電流變化,結(jié)果顯示,隨周齡增加,TRPA1電流從3D-4W除3W外逐漸增加,5W-6W電流逐漸減小,其中2W-4W顯著增大。表明TRPA1電流存在周齡依賴性,且3W-4W TRPA1電流快速上升,可能為TRPA1電流發(fā)育的關(guān)鍵期。4.TRPA1~(-/-)與TRPA1~(+/+)小鼠體重發(fā)育變化(1)3W-4W兩種小鼠的體重增加最快,是體重發(fā)育關(guān)鍵期。(2)1D-4W TRPA1~(-/-)小鼠體重均高于TRPA1~(+/+)小鼠,說明TRPA1基因敲除可能增加1D-4W小鼠體重。(3)連續(xù)13℃刺激時(shí),TRPA1~(-/-)小鼠體重顯著增加期延遲至2W,說明13℃刺激可能延緩TRPA1~(-/-)小鼠體重發(fā)育,連續(xù)17℃刺激無影響。(4)連續(xù)13℃和17℃刺激下TRPA1~(+/+)小鼠體重顯著增加期提前至1W,說明13℃和17℃刺激可能加速了TRPA1~(+/+)小鼠體重發(fā)育。(5)連續(xù)13℃刺激降低TRPA1~(-/-)小鼠(無顯著性差異)而增加TRPA1~(+/+)小鼠體重大小,并在4W時(shí)顯著增加。提示連續(xù)13℃刺激增加小鼠體重且可能與TRPA1基因有關(guān)。5.TRPA1~(-/-)與TRPA1~(+/+)小鼠冷敏行為發(fā)育變化(1)TRPA1~(-/-)小鼠單次13℃冷刺激時(shí),冷刺激縮足閾值在4W出現(xiàn)快速上升并具顯著差異,說明3W-4W可能是TRPA1~(-/-)小鼠冷敏行為發(fā)育關(guān)鍵期。出生后早期TRPA1~(+/+)小鼠冷敏行為均有顯著性差異。(2)出生后早期TRPA1~(-/-)小鼠1W-6W基本較TRPA1~(+/+)小鼠冷敏行為減弱,并且在4W時(shí)有顯著性差異,說明TRPA1基因缺失可能影響小鼠對低溫變化的正常感知。(3)連續(xù)13℃刺激時(shí)較單次13℃刺激,TRPA1~(-/-)小鼠冷敏行為相對不敏感期提前到3W且延長到5W,TRPA1~(+/+)小鼠3W-6W溫度響應(yīng)變得不敏感。結(jié)果提示連續(xù)低溫刺激延緩了小鼠對溫度的感知的發(fā)育,并且這種影響可能與TRPA1基因有關(guān)。6.胞外基質(zhì)對mTRPA1通道電流的作用(1)在0.1μg、0.2μg和0.4μg胞外基質(zhì)Tenascin-C存在時(shí):mTRPA1通道電壓誘發(fā)的電流減小,激活延緩,0.1μg降低效果最明顯。mTRPA1通道配體誘發(fā)電流減小,0.4μg時(shí)顯著性降低。(2)在2.5μg胞外基質(zhì)Tenascin-R存在時(shí):mTRPA1通道電壓誘發(fā)的電流增大,易化激活,而配體誘發(fā)的電流減小。綜上,大鼠冷敏行為、DRG上TRPA1 mRNA和TRPA1通道電流發(fā)育具有周齡依賴性,并都在3W-4W發(fā)生快速改變,說明3W-4W可能為大鼠TRPA1通道表達(dá)發(fā)育關(guān)鍵期。通過大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步確定了TRPA1通道發(fā)育關(guān)鍵期后進(jìn)一步利用敲除小鼠探究冷敏行為與TRPA1通道的關(guān)系。小鼠行為學(xué)結(jié)果提示連續(xù)溫度刺激和TRPA1基因可能影響小鼠冷敏行為和體重發(fā)育。Tenascin-C和Tenascin-R對mTRPA1通道電流有不同的影響,對不同誘發(fā)方式誘發(fā)出的電流的影響也不同。由于時(shí)間關(guān)系有關(guān)Tenascins與TRPA1介導(dǎo)的冷敏發(fā)育的分子與細(xì)胞整合機(jī)制有待后續(xù)工作闡明。
【圖文】：

圖 1-1 哺乳動物 TRP 離子通道家族系統(tǒng)樹以及 TRP 通道蛋白亞基的組織拓?fù)? 1-1 Mammalian TRP ion channel family phylogenetic tree and tissue topology map channel protein subunits[37]TRP 通道主要以同源或異源四聚體形式在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮作用（圖 1-的研究表明：TRPV1 通道通過 TRPV1 亞基 C 末端區(qū)域的 21 個氨基酸四聚體通道。作為一種多功能細(xì)胞感受器，TRP 通道主要存在于感覺神痛覺、溫覺、機(jī)械感覺等眾多生理過程。在炎癥和神經(jīng)受損期間，TR變化、機(jī)械刺激等更加敏感，因此被認(rèn)為是治療人類炎癥性和神經(jīng)性疼物靶點(diǎn)[38]。

哺乳動物 TRP 離子通道家族系統(tǒng)樹以及 TRP 通道蛋白亞基的組織mmalian TRP ion channel family phylogenetic tree and tissue topologychannel protein subunits[37]道主要以同源或異源四聚體形式在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮作用（表明：TRPV1 通道通過 TRPV1 亞基 C 末端區(qū)域的 21 個氨道。作為一種多功能細(xì)胞感受器，TRP 通道主要存在于感覺、機(jī)械感覺等眾多生理過程。在炎癥和神經(jīng)受損期間，械刺激等更加敏感，因此被認(rèn)為是治療人類炎癥性和神經(jīng)8]。
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：Q25

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王紅衛(wèi);趙偉;楊智f ;李慈珍;劉遠(yuǎn)謀;;早鈉通道電流增大對心肌電生理的影響[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年09期

2 喬曉艷;吳晉芝;耿曉勇;董有爾;;細(xì)胞膜離子單通道電流重構(gòu)的計(jì)算機(jī)仿真[J];計(jì)算機(jī)工程與應(yīng)用;2011年16期

3 曲興田;趙宏;徐剛;劉建芳;趙宏偉;;平板狀單通道電流變閥的研究[J];液壓與氣動;2010年01期

4 成秋平;邵義舜;;麻黃堿抑制起搏通道電流的藥理學(xué)機(jī)制研究[J];華中師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年03期

5 鄭吉建,莊心良,杜冬萍,茆慶洪,徐國輝;地西泮抑制交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞鈉通道電流的機(jī)制[J];中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2001年02期

6 畢輝,裴建明,朱妙章,胡三覺;緩激肽對背根節(jié)神經(jīng)元鈉通道電流的作用[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2003年04期

7 何艷,孫曉霞,張文杰,鐘國贛,張東祥,尹昭云;SLE患者外周血淋巴細(xì)胞膜K(V)通道電流的變化及意義[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2002年01期

8 鄭吉健,莊心良,劉寶剛,杜冬萍,徐國輝;咪唑安定對交感神經(jīng)元全細(xì)胞鈉通道電流的抑制作用[J];中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2000年02期

9 巫少榮;李自成;余健;郭軍;張愛東;林如波;;大蒜素對心室肌細(xì)胞膜鈉通道電流的影響[J];中國病理生理雜志;2011年04期

10 肖中舉,蘇平,佟振清;急性分離大鼠新皮層神經(jīng)元上激活的K_(ATP)單電導(dǎo)多通道電流[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;1999年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 謝暢;潘娜;李卉;丁久平;;酒精阻斷KCNQ1通道電流的機(jī)制研究[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

2 梅巖艾;;抑制K~+通道電流可以阻止大鼠小腦顆粒細(xì)胞的凋亡[A];2003’離子通道、受體與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)專題研討會專輯[C];2003年

3 張莉;吳博威;殷國榮;劉清華;王海龍;殷麗天;;Zacopride經(jīng)PKA通路介導(dǎo)對大鼠心肌kir2.1通道電流的激動作用[A];中國生理學(xué)會心血管生理學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

4 王昌松;龔偉;高曉華;張習(xí)春;程潔;高蓉;肖杭;;小鼠粗線期精母細(xì)胞K~+通道電流特性及氰戊菊酯的影響[A];中國毒理學(xué)會第四屆全國學(xué)術(shù)會議論文（摘要）集[C];2005年

5 蔡麗君;曾雄智;梁宋平;;敬釗纓毛蛛毒素-V對kv4.3通道的作用研究[A];第九屆中國生物毒素學(xué)術(shù)研討會論文摘要[C];2009年

6 李皖;周璧華;劉培山;馬洪亮;丁雅菲;徐云;;雷電三維磁場裝置研究[A];第22屆全國電磁兼容學(xué)術(shù)會議論文選[C];2012年

7 王海棠;劉文娟;姜勇;劉杰;;HMGB1對大鼠心肌細(xì)胞L型Ca~(2+)通道電流及瞬間外向K~+電流的影響[A];中國病理生理學(xué)會受體和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)專業(yè)委員會暨消化專業(yè)委員會聯(lián)合學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

8 夏冰清;方遂;陳學(xué)勤;胡紅;王華翌;高召兵;;程序性壞死執(zhí)刑蛋白MLKL形成新型陽離子通道[A];長三角地區(qū)神經(jīng)科學(xué)論壇2016暨第八次會員代表大會摘要集[C];2016年

9 李潔W，

本文編號：2674214