【摘要】：人參是一種多年生草本植物,作為中草藥在中國已有幾百年的歷史。人參的優(yōu)良品種稀少,生長周期較長,育種過程較難,隨著人參需求的加大,人參育種工作成為科學(xué)家們的研究重點。育種工作是人參繁殖的首要難題。體細(xì)胞胚發(fā)生(Somatic Embryo genesis)是體外誘導(dǎo)植株再生的重要手段體細(xì)胞胚發(fā)生可以不經(jīng)性細(xì)胞融合,而在特定條件下誘導(dǎo)新個體的形成,已成為研究植物胚胎發(fā)育的重要途徑。這種方法可以在較短時間內(nèi)培育出更多的優(yōu)良品種,人參體細(xì)胞胚發(fā)生的研究可以為人參育種困難等問題提供良好的解決方法。但離體培養(yǎng)的胚性細(xì)胞的分化需要誘導(dǎo)因子的作用及相關(guān)基因的表達(dá),根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)擬南芥或甘藍(lán)型油菜BBM基因在煙草中的異源表達(dá)增強(qiáng)了煙草再生能力并誘導(dǎo)自發(fā)愈傷組織、根和芽的形成,由此推測BBM基因與人參體細(xì)胞胚發(fā)生可能有關(guān)。本文以人參種子為材料,設(shè)計該基因的兼并引物,通過RACE法成功克隆人參種子中的BBM基因。近年來,從植物中分離出大量的轉(zhuǎn)錄因子,AP2/EREBP家族是其中之一,其轉(zhuǎn)錄因子與植物的生長發(fā)育和應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)。根據(jù)擬南芥中BBM基因在NCBI上搜索發(fā)現(xiàn)BBM基因?qū)儆贏P2(APETALA2)亞家族的轉(zhuǎn)錄因子。BBM基因在體細(xì)胞胚發(fā)生中起到關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。本研究利用RACE技術(shù)克隆了人參BBM基因的全長cDN A序列,并對該基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析。研究結(jié)果如下:1、從人參中克隆的BBM基因全長cDNA長度為2256bp,包含由2010個堿基所構(gòu)成的開放閱讀框(ORF),編碼由669個氨基酸所組成的蛋白。2、BBM基因編碼的蛋白的相對分子量為73.57 KDa,等電點(PI值)為6.02;該蛋白包含euANT2-euANT6、bbm-1等基序和兩個AP2結(jié)構(gòu)域(AP2-R1和AP2-R2),屬于AP2亞族的轉(zhuǎn)錄因子。人參BBM基因與煙草、大豆、苜蓿的BBM基因親緣關(guān)系較近。本研究中通過RACE方法成功地克隆人參BBM因基(PgBBM),并進(jìn)行序列分析和蛋白功能的預(yù)測,這為利用BBM基因誘導(dǎo)人參體細(xì)胞胚以及進(jìn)行相關(guān)研究奠定理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

２．３．邋２人參基因中間片段的擴(kuò)增逡逑２．３．邐２．１人參基因退火溫度的選擇逡逑梯度ＰＣＲ結(jié)果如（圖２）所示，基因在退火溫度分別為４０、逡逑４１、４８°Ｃ時發(fā)現(xiàn)特異性條帶，在４１°Ｃ時特異性條帶Ｍ亮，因此將／ｉ／？Ｍ逡逑基因片段克隆的退火溫度設(shè)定為４ＰＣ。逡逑圖２邐基因梯度退火溫度ＰＣＫ電泳圖逡逑Ｆｉｇ．２邋ＢＢＭ邋ｇｅｎｅ邋ｇｒａｄｉｅｎｔ邋ｉｕｉｎｅａｌｉｎｇ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ邋ＰＣＲ邋ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ逡逑注：８個梯度溫度從左至右依次為４０、４１、４４、４８、５２、５６、５８、６０°Ｃ逡逑Ｎｏｔｅ：Ｅｉｇｈｔ邋ｇｒａｄｉｅｎｔ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ邋ｆｒｏｍ邋ｌｅｆｔ邋ｔｏ邋ｒｉｇｈｔ邋ａｒｅ邋４０，邋４１，邋４４，邋４８，邋５２，邋５６，邋５８，邋６０邋°（逡逑２．邋３．邋２．邋２邋／ＷＭ基因片段ＰＣＲ電泳檢測逡逑爪從總ＲＮＡ逆轉(zhuǎn)錄獲得的ｃＤＮＡ擴(kuò)增ＰＣＲ＾邋，在瓊脂糖凝膠Ｉ．屯泳檢逡逑測和分離擴(kuò)增產(chǎn)物，，Ｈ標(biāo)條帶在約１３００ｂｐ處（如閣３邋），這Ｕ沏Ｈｌｊ的片ｆｔ逡逑人小－致．逡逑１４逡逑

圖１總ＲＮＡ提取電泳圖逡逑．ｌ邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｅｒｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｔｏｔａｌ邋ＲＮＡ邋ｅｘｔｒａｃｔｉ基因中間片段的擴(kuò)增逡逑基因退火溫度的選擇逡逑果如（圖２）所示，基因在退火異性條帶，在４１°Ｃ時特異性條帶Ｍ火溫度設(shè)定為４ＰＣ。逡逑
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S567.51;Q943.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2643218