【摘要】：6mA甲基化是DNA甲基化修飾的一種重要方式,受甲基轉(zhuǎn)移酶N6AMT1基因的調(diào)控。為研究N6AMT1基因的功能,利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)構(gòu)建N6AMT1基因敲降的HEK293細(xì)胞系,同時(shí)在Hela細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)N6AMT1基因,檢測(cè)N6AMT1基因表達(dá)變化對(duì)細(xì)胞增殖和遷移能力的影響。結(jié)果表明:正常腎上皮組織細(xì)胞系HEK293中N6AMT1基因表達(dá)水平顯著高于癌細(xì)胞;正常肝細(xì)胞系LO2中N6AMT1基因表達(dá)水平顯著高于肝癌細(xì)胞系HepG2和SMMC-7721;N6AMT1基因敲降顯著增強(qiáng)HEK293細(xì)胞的增殖及遷移能力;而Hela細(xì)胞過(guò)表達(dá)N6AMT1基因后,細(xì)胞的增殖和遷移均顯著受到抑制。這一研究提示N6AMT1基因介導(dǎo)的6mA甲基化可能對(duì)細(xì)胞增殖和遷移有重要影響。
【圖文】：

細(xì)胞設(shè)３個(gè)重復(fù)。向配套的２４孔板中加入６００μＬ含２０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)２４ｈ后，用結(jié)晶紫染色２０ｍｉｎ后用棉簽擦去小室內(nèi)部細(xì)胞。隨機(jī)選�。箓�(gè)視野觀察細(xì)胞并拍照，使用ＩｍａｇｅＪ軟件計(jì)算各細(xì)胞數(shù)量。１．５數(shù)據(jù)處理用ＳＰＳＳ２０．０統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行差異分析，多組間比較采用單因素方差分析，通過(guò)Ｇｒａｐｈａｄ軟件整理結(jié)果并作圖。２結(jié)果與分析２．１Ｎ６ＡＭＴ１基因在不同細(xì)胞系中ＲＮＡ表達(dá)水平圖１不同細(xì)胞系Ｎ６ＡＭＴ１基因相對(duì)表達(dá)量＊Ｆｉｇ．１ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＮ６ＡＭＴ１ｇｅｎｅｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｅｌｌｌｉｎｅｓ＊Ａ．ＨＥＫ２９３；Ｂ．ＬＯ２；Ｃ．ＳＭＭＣ－７７２１；Ｄ．ＡＧＳ；Ｅ．ＢＣＧ８２３；Ｆ．ＨＣＴ１１６；Ｇ．Ｈｅｌａ；Ｈ．ＨｅｐＧ２；Ｉ．ＭＣＦ－７；Ｊ．ＭＤＡ－２３１；Ｋ．ＫＹＳＥ－１５０通過(guò)ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測(cè)２個(gè)正常細(xì)胞系（ＨＥＫ２９３、ＬＯ２）及９個(gè)癌細(xì)胞系（ＡＧＳ、ＢＧＣ８２３、ＨＣＴ１１６、Ｈｅｌａ、ＨｅｐＧ２、ＫＹＳＥ－１５０、ＭＣＦ－７、ＭＤＡ－２３１和ＳＭＭＣ－７７２１）中Ｎ６ＡＭＴ１基因的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，Ｎ６ＡＭＴ１基因在ＨＥＫ２９３中表達(dá)水平最高，顯著高于其他癌細(xì)胞系；人正常肝細(xì)胞系ＬＯ２中Ｎ６ＡＭＴ１基因的表達(dá)水平雖然低于ＨＥＫ２９３細(xì)胞，但顯著高于肝癌細(xì)胞系ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ－７７２１（圖１）。這些結(jié)果表明腫瘤細(xì)胞中Ｎ６ＡＭＴ１基因的表達(dá)

圖２不同細(xì)胞株Ｎ６ＡＭＴ１基因相對(duì)表達(dá)量＊Ｆｉｇ．２ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＮ６ＡＭＴ１ｇｅｎｅｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｅｌｌｌｉｎｅｓ＊Ａ．ＨＥＫ２９３（ＨＥＫ２９３細(xì)胞）；Ｂ～Ｇ．ＨＥＫ２９３－ＮＫ１～ＨＥＫ２９３－ＮＫ６（Ｎ６ＡＭＴ１基因敲降單克隆細(xì)胞）圖３ＨＥＫ２９３和ＨＥＫ２９３－ＮＫ細(xì)胞生長(zhǎng)曲線Ｆｉｇ．３ＣｅｌｌｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｓｏｆＨＥＫ２９３ａｎｄＨＥＫ２９３－ＮＫｃｅｌｌｓ＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１圖４ＨＥＫ２９３和ＨＥＫ２９３－ＮＫ細(xì)胞的遷移Ｆｉｇ．４ＭｉｇｒａｔｉｏｎｏｆＨＥＫ２９３ａｎｄＨＥＫ２９３－ＮＫｃｅｌｌｓ＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１因表達(dá)量顯著升高。由圖６可知，從細(xì)胞處理后第２天起，轉(zhuǎn)染ｐｃ－ＤＮＡ３．１－Ｎ６ＡＭＴ１細(xì)胞（Ｈｅｌａ－ｐＮ）的增殖數(shù)量顯著高于對(duì)照細(xì)胞（Ｈｅｌａ－ｐｃ）；處理后第３～５天兩組細(xì)胞的增殖數(shù)量達(dá)到極顯著差異。這說(shuō)明升高Ｎ６ＡＭＴ１基因的表達(dá)水平，能顯著抑制Ｈｅｌａ細(xì)胞的增殖。圖５Ｈｅｌａ細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ｎ６ＡＭＴ１基因后的過(guò)表達(dá)＊Ｆｉｇ．５Ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＮ６ＡＭＴ１ｇｅｎｅｉｎＨｅｌａｃｅｌｌｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｖｅｃｔｏｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＮ６ＡＭＴ１＊Ａ．Ｈｅｌａ；Ｂ．Ｈｅｌａ－ｐｃ（轉(zhuǎn)染ｐｃＤＮＡ３．１的Ｈｅｌａ細(xì)胞）；Ｃ．Ｈｅｌａ－ｐＮ（轉(zhuǎn)染ｐｃ－ＤＮＡ３．１－Ｎ６ＡＭＴ１的Ｈｅｌａ細(xì)胞）圖６過(guò)表達(dá)Ｎ６ＡＭＴ１基因?qū)Γ龋澹欤峒?xì)胞生長(zhǎng)的影

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本文編號(hào)：2626194